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yuxia82012木蟲 (著名寫手)
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板上有做過Gel-shift的朋友沒?
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最近準(zhǔn)備做這個,主要是檢驗蛋白和DNA的結(jié)合作用,我是把可能結(jié)合的DNA合成為5‘-Biotin的引物,表達蛋白反應(yīng)后再跑聚丙烯酰胺的非變性膠,后面用照膠儀檢測熒光,由于是第一次做,也沒什么經(jīng)驗,不知道各位有什么建議以及注意事項沒? 還有一點不確定的是這個蛋白結(jié)合DNA位點是結(jié)合雙鏈的還是單鏈的,如果是雙鏈的,我能不能合成一對互補引物通過退火是她們變成雙鏈再反應(yīng)? |
微納材料 |

鐵桿木蟲 (正式寫手)
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1.標(biāo)記的探針與結(jié)合蛋白需要在室溫下結(jié)合一段時間,一般為10-20分鐘。 2.如果是檢驗可能的結(jié)合還需要做探針的冷競爭反應(yīng)。 3.注意下電泳時間和轉(zhuǎn)膜的時間,如果你是用干膠儀的話就需要注意電泳的時間,一般為10v/cm.。 4.結(jié)合實驗需要用雙鏈的探針,可以使用退火的雙鏈探針。 |
木蟲 (著名寫手)

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