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y_ylili鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
提取大腸桿菌質(zhì)粒失敗的原因
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用堿裂解法發(fā)提取大腸桿菌質(zhì)粒DNA~加入異丙醇之后有大量的絮狀物，離心后沉淀很少，乙醇洗滌，干燥，跑膠的居然沒(méi)有亮帶？！已經(jīng)做了3次~十幾管了~嗚~糾結(jié)....求助.... |
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【答案】應(yīng)助回帖
y_ylili(金幣+1): 莪是加了3液以后再加的氯仿 異戊醇的(～ o ～)~zZ 2011-04-26 18:02:15
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你的試劑配制有問(wèn)題：你用的是堿裂解法提取質(zhì)粒，溶液一和溶液二沒(méi)有問(wèn)題，但溶液三你叫它中和液，但成分竟然是酚氯仿異戊醇，沒(méi)有酸怎么能叫中和液呢，正常的成分是冰醋酸和3mol/L的醋酸鉀，溶液三中的鉀離子置換了SDS中的鈉離子生成了不溶性的PDS，大家都知道SDS專門喜歡結(jié)合蛋白質(zhì)，平均兩個(gè)氨基酸上結(jié)合一個(gè)SDS分子，所以由于置換產(chǎn)生的大量沉淀順便連蛋白質(zhì)也沉淀下來(lái)了，又因?yàn)榛蚪MDNA實(shí)在太長(zhǎng)了，在這個(gè)過(guò)程中很自然的被PDS給共沉淀了。你所謂的酚氯仿異戊醇是純化DNA或RNA時(shí)用到的，先弄清楚每種試劑的作用做起來(lái)就不會(huì)這么盲目了，祝你好運(yùn)！ |
10樓2011-04-25 15:43:17
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2樓2011-04-24 17:17:57
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4樓2011-04-24 18:14:31
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5樓2011-04-24 22:43:35
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7樓2011-04-25 00:40:23
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