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wkl1984金蟲 (小有名氣)
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[求助]
RNA提取問(wèn)題
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| 從細(xì)胞中提取ＲＮＡ，在加入Trizol后，混勻，室溫放置10分鐘，目的是RNA和蛋白分離，然后加入氯仿，促使RNA進(jìn)入水相中，12000轉(zhuǎn)，離心10分鐘，取上清轉(zhuǎn)移至新管，加入等體積的異丙醇，目的為了使ＲＮＡ沉淀，可是離心后沒(méi)有沉淀，我不知道還用不用繼續(xù)往下做？出現(xiàn)這種情況的原因在哪兒？請(qǐng)各位指教 |
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2樓2011-04-29 08:23:02
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3樓2011-04-29 08:31:33
【答案】應(yīng)助回帖
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加完TRIzol后，要立即把細(xì)胞裂解，這一步要求快，放十分鐘沒(méi)必要，5分鐘就ok； 加氯仿之后，要用力震蕩，（用最大的力氣），這步是也要放置一會(huì)的吧 此步之后高速4度離心15分鐘吧 之后就是把上清洗出來(lái)（1ml TRIzol 的話 沒(méi)必要吸出很多 300微升 就很多了，吸多了 不保險(xiǎn)呀） 異丙醇我都加 500微升 加進(jìn)去要槍頭混勻，之后靜置10min，低溫不利于沉淀哦，室溫，之后4度離心，沉淀很少的，不過(guò)對(duì)著光 用肉眼看 還是很能看清楚的。 多提取幾次 就利索了 |
4樓2011-04-29 08:53:18
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5樓2011-04-29 08:54:53
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