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nick.nye-0313銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于westen-blot實(shí)驗(yàn)的具體步驟及實(shí)驗(yàn)中注意的問題，請(qǐng)教！
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| 最近在做westen，在做的過程中有些問題。比如轉(zhuǎn)膜時(shí)間多長為好，1個(gè)小時(shí)？不同的蛋白通路有區(qū)別嗎？還有曝光片子的時(shí)候，多久為好？有詳細(xì)的規(guī)定嗎？還有就是你們大家做完實(shí)驗(yàn)后的這些膠，顯影定影液失效后最后都是如何處理的？定影液里有沒有致癌的物質(zhì)？做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候應(yīng)當(dāng)注意些什么事情？小弟初接觸這方面實(shí)驗(yàn)，希望有做過的同仁指點(diǎn)指點(diǎn)，十分感謝！ |
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西瓜
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3樓2011-05-02 00:35:32
elvias
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+5, EPI+1): 鼓勵(lì)交流 2011-05-02 00:33:55
nick.nye-0313(金幣+20): 2011-05-26 08:55:30
西瓜(金幣+5, EPI+1): 鼓勵(lì)交流 2011-05-02 00:33:55
nick.nye-0313(金幣+20): 2011-05-26 08:55:30
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1.轉(zhuǎn)膜時(shí)間要看你目的蛋白的大小而定，蛋白分子量越大，轉(zhuǎn)膜的電壓電流要更大，時(shí)間也要更長些，所以沒有定值。 2.不明白你說的蛋白通路是什么意思，按我的理解，只要你通路上的蛋白有變化，并且足夠顯著的話，在westen-blot中是可以顯示出區(qū)別的。 3.曝光時(shí)間沒有一個(gè)定值，如果你的抗體特異性極強(qiáng)，并且你的蛋白豐度極高，比如actin一般我曝光10秒鐘就足夠了，如果你的單擺風(fēng)度低的話就要適當(dāng)延長曝光時(shí)間。 4.我這的膠，以及顯影定影液都集中起來，一起處理。 5.致不致癌我不敢確定的回答，但是肯定對(duì)身體不好，需要戴手套。 6.westen-blot需要注意的事情很多，包括跑SDS-PAGE，轉(zhuǎn)膜，孵育，洗滌等等，建議在論壇里找一下以前發(fā)過的流程和注意事項(xiàng)。 |
2樓2011-05-01 22:54:42
nuoyaeva
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4樓2011-05-03 16:08:36
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5樓2011-05-07 10:52:19
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