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蛋白濃縮過(guò)程中發(fā)生沉淀 已有1人參與
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蛋白在用PEG6000包埋濃縮過(guò)程中透析袋沒(méi)擠緊,蛋白溶液流出了,PEG溶液是否可能進(jìn)入透析袋?而且蛋白發(fā)生沉淀了,但不是絮狀的沉淀,是那種很細(xì)的跟面粉似的沉淀,想請(qǐng)教下濃縮過(guò)程中為什么發(fā)生沉淀? 我的這種沉淀發(fā)生變性了嗎? 怎樣鑒別蛋白是否變性? 多謝蟲友們! |

專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
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專家經(jīng)驗(yàn): +248 |
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1、前幾天跟你在短信里說(shuō)了,你的透析袋是8千的,PEG分子量約為6千,是肯定你能夠進(jìn)入透析袋里的,建議起碼用PEG2萬(wàn)來(lái)濃縮,但是也不保證絕對(duì)不能進(jìn)入,因?yàn)橥肝龃目讖揭膊灰欢ń^對(duì)均一,總有些差異的,遇到大一點(diǎn)的孔徑就能進(jìn)去了。 2、透析袋破了,就更不用說(shuō)了,肯定有進(jìn)去了的。不是說(shuō)袋子里的東西是處于流出狀態(tài)的,PEG就不能進(jìn)去,不是絕對(duì)的。下次買透析袋用的夾子,用新處理的透析袋,就沒(méi)那么容易破了。 3、濃縮過(guò)程中有東西沉淀很正常,因?yàn)榭赡苁悄撤N溶質(zhì)超過(guò)溶解度了,可能是鹽類,也可能是蛋白質(zhì),這跟沉淀的性狀沒(méi)關(guān)系,特別是我看你有一張?zhí)永,有人建議你在4度濃縮,低溫下溶解度大多會(huì)下降,所以沉淀很正常。當(dāng)然,也可能是蛋白質(zhì)的沉淀,因?yàn)镻EG被用來(lái)沉淀蛋白質(zhì),可能你樣品中有的蛋白質(zhì)很容易被PEG沉淀下來(lái),而PEG又通過(guò)透析袋的大孔徑進(jìn)入到樣品中。我曾經(jīng)試過(guò)PEG沉淀蛋白質(zhì),但是我所要的蛋白質(zhì)對(duì)PEG不感冒,不沉淀,甚至使用2萬(wàn),35%的含量都不沉淀,但是有的文章用的PEG聚合度和濃度都很低就能沉淀了,說(shuō)不定你遇到的就是這個(gè)情況。 4、至于蛋白質(zhì)有沒(méi)有變性,很不好說(shuō),即使是沉淀了也不一定就會(huì)變性的。至于怎么鑒別有沒(méi)有變性,這也不好說(shuō),得看你的蛋白質(zhì)怎么檢驗(yàn),我們都不知道你的蛋白質(zhì)是哪種。 有空就去找找這幾篇,就明白了。 PEG6000沉淀結(jié)合差速離心方法濃縮水中脊髓灰質(zhì)炎病毒 蛋白質(zhì)沉淀劑對(duì)棉鈴蟲谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的部分純化 聚乙二醇8000對(duì)棉鈴蟲微粒體蛋白沉淀作用的研究 影響聚乙二醇沉淀試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)因素的探討 [ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-9 at 18:56 ] |

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