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dingjunrong木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于實(shí)時(shí)熒光定量PCR中絕對(duì)定量的一些問(wèn)題
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| 我要對(duì)樣品中一個(gè)屬的菌進(jìn)行定量，模板是提取的基因組DNA，除了做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)外還要有內(nèi)標(biāo)基因嗎，如果要怎么選擇，我是用自己連的質(zhì)粒做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的，怎樣才能準(zhǔn)確測(cè)得它的濃度，從而確定它的拷貝數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)每次上樣都要做一次嗎？哪個(gè)公司的試劑盒質(zhì)量比較好？萬(wàn)分感謝了~~ |
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2樓2011-05-11 10:58:38
西瓜
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【答案】應(yīng)助回帖
dingjunrong(金幣+5): 謝謝 2011-05-12 09:33:09
dingjunrong(金幣+5): 2011-11-07 09:55:38
dingjunrong(金幣+5): 2011-11-07 09:55:38
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內(nèi)參基因是需要的，可以消除樣品量的差異，一般用actin，tublin，GAPDH等等。 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)一般每次都要加入，因?yàn)镻CR影響因素很多，同樣的樣品進(jìn)行不同次的PCR得到的Ct值一般都不一樣，只有同一次PCR里的樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)才能進(jìn)行有效比較。 試劑盒的話(huà)，我只用過(guò)Takara和天根的，沒(méi)覺(jué)得有什么差異，但是Takara的是混好的一管，比較方便，天根的用之前還得把兩個(gè)東西混起來(lái)（不知道現(xiàn)在新產(chǎn)品如何）。我們生科院總的來(lái)說(shuō)，用Takara和Toyobo的比較多。提醒一下，有的試劑盒含Rox，有的不含，也有的公司單獨(dú)賣(mài)。Rox是AB公司最先用來(lái)校正溶液量差異的一種熒光染料，AB公司的熒光定量PCR儀需要用到，其他公司的有的不能用，有的是用不用都可以，這個(gè)要留意下。個(gè)人推薦能用ROX就用。 |
3樓2011-05-11 13:39:56
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