 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 15 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1616 | 回復(fù): 14 | ||||
[交流]
酶切條件
|
最近要開始做酶切了，在研究反應(yīng)條件，檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，不同實(shí)驗(yàn)中同一種內(nèi)切酶的孵育時(shí)間竟然還不相同，有說過夜的，有的就2,3個(gè)小時(shí)的，差別還挺大。另外，有說PCR產(chǎn)物要先回收的，而實(shí)際上也有直接切下去，很好奇這個(gè)反應(yīng)條件該怎么定下來~~~ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有53人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
老蟲子的注冊小木蟲18周年大禮包
+5/150
-
五邑大學(xué)（江門-利物浦公共衛(wèi)生研究所）招收藥學(xué)、生物醫(yī)藥專業(yè)調(diào)劑生
+1/129
-
環(huán)境科學(xué)/環(huán)境工程專業(yè)，江蘇
+1/88
-
0854電子信息調(diào)劑，閩南師范大學(xué)光電芯片研發(fā)小組
+1/40
-
歡迎化學(xué)、生物與醫(yī)藥、藥學(xué)，生物、食品等相關(guān)專業(yè)的同學(xué)
+1/37
-
【分享】招收08工學(xué)碩士（要求過國家線）
+1/34
-
【林業(yè)專業(yè)碩士調(diào)劑1名】中國林業(yè)科學(xué)研究院
+1/33
-
西南科技大學(xué)楊文彬教授課題組接收材料、化工、化學(xué)類專業(yè)研究生調(diào)劑 。
+1/28
-
西華大學(xué)材料學(xué)院表面科學(xué)與工程技術(shù)科研團(tuán)隊(duì)2026年招收研究生
+1/11
-
化工畢業(yè)三年轉(zhuǎn)電子信息可行嗎？？各位同行前輩
+1/11
-
求調(diào)劑
+1/10
-
【博士招生】武漢科技大學(xué)招收材料、化工、環(huán)境、冶金類2026年“申請-考核”制博士生
+1/9
-
聚焦心力衰竭和動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制研究｜國家老年醫(yī)學(xué)中心心血管疾病科研團(tuán)隊(duì) 學(xué)術(shù)成果
+1/8
-
蘇州初創(chuàng)公司誠聘化學(xué)過程工藝與硬件系統(tǒng)工程師
+1/7
-
英國全額資助博士招生｜射頻與無線系統(tǒng)方向（全球招生）
+1/4
-
【水文、水質(zhì)模擬】香港科技大學(xué)（廣州）博士后招聘
+1/3
-
Top-88悉尼科技大學(xué)數(shù)據(jù)科學(xué)/AI 招收2027年入學(xué) 校獎(jiǎng) 博士生1到2名(國際和本地學(xué)生）
+1/3
-
求調(diào)劑
+1/2
-
武漢紡織大學(xué)2026年招收碩士研究生【高性能、功能紡織復(fù)合材料方向】
+1/1
-
北京高校副校長團(tuán)隊(duì)招收機(jī)械類，環(huán)境類學(xué)碩和專碩
+1/1
2樓2011-05-12 23:07:31
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +248 - MolEPI: 46
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19479.4
- 帖子: 6591
- 在線: 2779.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 856414
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
xwsooo(金幣+1): 2011-05-13 07:49:49
dhd997(金幣+5): 很對 2011-05-13 09:15:17
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
xwsooo(金幣+1): 2011-05-13 07:49:49
dhd997(金幣+5): 很對 2011-05-13 09:15:17
|
你切多久能切好就切多久，別人的只能參考，而且你不同的樣品用同一種酶來切不一定切多久就能切好。就是同樣的材料，不同的時(shí)候提取的純度也不同，酶切時(shí)間也不同，就像我有一個(gè)質(zhì)粒，某次提取的一切就好，另一次提取的老是切不完全。 PCR產(chǎn)物也是，別人的產(chǎn)物或許沒有一點(diǎn)兒雜帶，而你的就不一定了，人家不回收就切是因?yàn)橹滥茏龊茫阕约旱倪�不知道呢，別光看別人怎么做，別人的不一定適合自己。 |
3樓2011-05-13 01:50:06
cdl007
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 41
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.025
- 金幣: 2570.6
- 帖子: 545
- 在線: 123.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 275133
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
xwsooo(金幣+1): 2011-05-13 07:49:46
dhd997(金幣+5): good 2011-05-13 09:15:27
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
xwsooo(金幣+1): 2011-05-13 07:49:46
dhd997(金幣+5): good 2011-05-13 09:15:27
|
酶切條件的說，說明書上1個(gè)小時(shí)就能切開。。。 但是在加保護(hù)堿基的時(shí)候有個(gè)表不知道你注意了沒有 http://lvxh.bokee.com/3953618.html 可以參考一下 有的酶是2個(gè)小時(shí)效率就不錯(cuò)，但是有的要20小時(shí)才達(dá)到90% 所以保守一點(diǎn)的話，俺們基本都是過夜切的 時(shí)間太長也不好，怕切除星號(hào)活性 切得時(shí)候，更深一點(diǎn)的話，要考慮目標(biāo)序列的二級(jí)結(jié)構(gòu)。，所以切長點(diǎn)時(shí)間是首選 不過你可以切完了泡個(gè)電泳看看，多長時(shí)間能切開一目了然 |
4樓2011-05-13 05:24:30
雪山飛狐7233
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 18826.4
- 帖子: 1530
- 在線: 199.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 593313
5樓2011-05-13 06:40:57
6樓2011-05-13 07:50:51
7樓2011-05-13 07:54:29
8樓2011-05-13 07:55:23
★ ★
dhd997(金幣+2): 如果把你的問題匯總一下，發(fā)個(gè)資源帖，也可以幫助大家啊 2011-05-13 09:16:11
dhd997(金幣+2): 如果把你的問題匯總一下，發(fā)個(gè)資源帖，也可以幫助大家啊 2011-05-13 09:16:11
|
俺那個(gè)說明書木有寫參考反應(yīng)體系。。但有這樣一些文字： 16-hour incubationg:a 50 ul reaction containing 1 ug of DNA and 50 units of enzyme incubated for 16 hours results in the same pattern of DNAbands as a reaction incubated for 1 hour with 1 unit of enzyme. survival in a reaction :a minimum of 0.13 unit is required to digest 1 ug of substrate DNA in 16 hours 是不是可以參照這些設(shè)計(jì)體系？ |
9樓2011-05-13 08:02:19
shaquila
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 1484.8
- 帖子: 553
- 在線: 182.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 654839
10樓2011-05-13 10:16:54
bbwalkman
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 6
- 應(yīng)助: 43 (小學(xué)生)
- 金幣: 2334.5
- 帖子: 240
- 在線: 171.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1279904
11樓2011-05-13 10:22:09
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
xwsooo(金幣+2): 非常感謝 2011-05-13 15:17:05
dhd997(金幣+5): 鼓勵(lì)交流 2011-05-13 15:21:46
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
xwsooo(金幣+2): 非常感謝 2011-05-13 15:17:05
dhd997(金幣+5): 鼓勵(lì)交流 2011-05-13 15:21:46
|
不同內(nèi)切酶，不同公司產(chǎn)品都有所不同，如果做雙酶切最好選用同一家公司的，因?yàn)橥还緯?huì)為雙酶切準(zhǔn)備公用buffer。各種離子濃度時(shí)影響酶切效率的關(guān)鍵之一。至于酶切時(shí)間，都是不同的，每個(gè)公司以及不同的沒都有區(qū)別，你可以仔細(xì)看他們的產(chǎn)品說明書，一般是比較大的一本書上，上面都有，上面還有好多注意事項(xiàng)和例子什么的，講的很詳細(xì)。酶切時(shí)間和酶的加入量要根據(jù)具體情況調(diào)配。單酶切和雙酶切即使酶相同，也是有區(qū)別的，因?yàn)殡p酶切換用了公用buffer，降低酶的效率，所以有時(shí)候要加大個(gè)別酶的加入量或延長反應(yīng)時(shí)間，才能完全酶切好。至于是否需要回收，這個(gè)回答是肯定的，最好回收，要么就純化。因?yàn)镻CR的Buffer與內(nèi)切酶是不一樣的，即使成分一樣，含量也有差別，肯定會(huì)有影響的，有些人不回收也做出來了，那是運(yùn)氣好，正好那酶的Buffer跟PCR的相似或那酶對Buffer要求不高。但要是沒切出來，那就要注意一下了。祝你實(shí)驗(yàn)順利！ |
12樓2011-05-13 10:36:25
|
嗯，是有說明書，上面說了孵育溫度，但沒有寫酶切時(shí)間啊，只有這樣一些文字： 16-hour incubationg:a 50 ul reaction containing 1 ug of DNA and 50 units of enzyme incubated for 16 hours results in the same pattern of DNAbands as a reaction incubated for 1 hour with 1 unit of enzyme. survival in a reaction :a minimum of 0.13 unit is required to digest 1 ug of substrate DNA in 16 hours 是不是可以參照這些設(shè)計(jì)體系？ |
13樓2011-05-13 10:36:40
14樓2011-05-13 10:38:51
15樓2011-05-13 17:25:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 xwsooo 的主題更新
| 15 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程調(diào)劑 +9 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[有機(jī)交流]
 甲基亞磺磺酸鈉和甲基磺酸酯反應(yīng)機(jī)理
10+3
|
kaobao456 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大材料工程290求調(diào)劑 +11 | Youth_ 2026-03-30 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 抱歉 +3 | 田洪有 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +14 | land xuxu 2026-03-26 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +5 | Faune 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 375求調(diào)劑 +6 | 雨夏整夜 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | QiMing7 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +7 | min3 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08開頭275求調(diào)劑 +4 | 拉誰不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 315調(diào)劑 +4 | 0860求調(diào)劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
|
13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
|