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融合pcr怎么總是不成功啊
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| 最近想將1100bp左右的兩個(gè)片段通過(guò)融合pcr形成一個(gè)2200bp大小的目的片段，做個(gè)幾次OVERLAPPING PCR ,開始是p不出目的條帶，好不容易p出目的條帶連到pMD18T上送去測(cè)序，結(jié)果只有一段600bp是我期中的一條目的片段的序列。不知道是為什么？請(qǐng)做過(guò)融合pcr的同志們指教，不勝感激。 |
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2樓2011-05-16 20:12:14
shaquila
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3樓2011-05-17 18:34:34
4樓2011-05-17 23:52:34
5樓2011-05-17 23:55:03
dhd997: 對(duì)于你的問(wèn)題可以再一樓編輯，也可以引用回復(fù)，可以及時(shí)讓蟲友看到。 2011-05-20 08:30:55
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我第一輪pcr的模板是連結(jié)目的條帶的pMD-18T載體，第二輪用的是pcr產(chǎn)物，沒(méi)有回收，這樣可以p出與overlapping大小相同的條帶，但是測(cè)序結(jié)果總是不對(duì)。 第二輪以第一輪回收產(chǎn)物為模板，稀釋50倍，和沒(méi)有稀釋均沒(méi)有帶。 不知道樓上的所說(shuō)的高保真的酶是什么，我覺(jué)得Takara 的 primerstar 不太好用，不知道有沒(méi)有什么好的推薦，不勝感激。 |
6樓2011-05-19 23:00:16
7樓2011-05-20 12:46:01
8樓2012-05-28 09:24:04
njauwxl
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9樓2014-08-05 11:15:20
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
10樓2015-05-14 20:37:12
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