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夢(mèng)想與現(xiàn)實(shí)共舞木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
FITC標(biāo)記蛋白中的Sephadex G25柱
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| 我想用熒光標(biāo)記蛋白，現(xiàn)在從網(wǎng)上找到一些實(shí)驗(yàn)方法大致相同，其中最后一步都是用Sephadex G25柱除去游離熒光素，有的在這一步前面有加透析，有的沒(méi)有。我現(xiàn)在的疑問(wèn)是Sephadex G25柱除了可以除去游離的熒光素，還有什么作用？我知道透析可以將小分子的FITC除去，如果Sephadex G25柱僅是除FITC，那么用透析不就可以了嗎？非得要用Sephadex G25柱嗎? |
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ashui001
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【答案】應(yīng)助回帖
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lixiangde(金幣+2): 感謝回帖交流 2011-05-19 18:08:21
夢(mèng)想與現(xiàn)實(shí)共舞(金幣+10): 請(qǐng)問(wèn)每次透析所需的溶液要有多少合適？比如5ml的溶液，透析液要多少呢？ 2011-05-19 21:56:19
lixiangde(金幣+2): 感謝回帖交流 2011-05-19 18:08:21
夢(mèng)想與現(xiàn)實(shí)共舞(金幣+10): 請(qǐng)問(wèn)每次透析所需的溶液要有多少合適？比如5ml的溶液，透析液要多少呢？ 2011-05-19 21:56:19
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G25柱和透析的目的都是除去沒(méi)修飾到蛋白上的游離熒光分子，二者用一個(gè)就行了 G25柱實(shí)驗(yàn)時(shí)間比較短，但裝柱，和檢測(cè)都比較麻煩，最好有AKTA儀器做起來(lái)比較方便 透析做起來(lái)比較簡(jiǎn)單，根據(jù)你的蛋白和熒光素的分子量選擇適當(dāng)分子量的透析袋，透析1-2天也幾乎能去除游離的熒光分子，透析溶液要用蛋白的緩沖液，剛開(kāi)始透析的時(shí)候多換幾次液 |
2樓2011-05-19 16:19:41
ashui001
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3樓2011-05-20 08:31:52
夢(mèng)想與現(xiàn)實(shí)共舞
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4樓2011-05-20 17:28:31
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