 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4296 | 回復: 20 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 BioEPI ，點擊這里進行查看 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
happy-j銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
WB結(jié)果不理想，呼喚幫助
|
||
|
WESTERN BLOT新手，重復了好幾次都快郁悶了。。。 第一張圖是β-actin的結(jié)果，第一次的時候結(jié)果挺好的，可是不知道為什么最近幾次都是這樣，出來的條帶不清楚而且很細。。。而且還有說不清的雜點，呼喚高手指點~~~ 具體實驗操作： 從Hep G2細胞中用碧云天的中性裂解液提的蛋白，用的abmart的一抗，稀釋比例1:4000（試用裝，說明書中說可用1:5000做），二抗稀釋比例1:4000。 上樣蛋白100ug/20ul 分離膠濃度12%，電泳條件：100V，150min; 轉(zhuǎn)膜條件：250mA, 70min; 5%脫脂奶粉封閉1h, 一抗4度孵育過夜 第二張圖是硫酸轉(zhuǎn)移酶蛋白的結(jié)果，蛋白源及提取方法、電泳、轉(zhuǎn)膜條件如上�？贵w應(yīng)該沒有問題，稀釋比例按照說明進行。這個為什么條帶之間界限不清楚，而且為什么在條帶交際處顯色較深？ [ Last edited by happy-j on 2011-5-17 at 23:59 ] |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 有價值的生物經(jīng)驗貼 |
» 猜你喜歡
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有16人回復
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
材料工程專碩調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
一志愿天大材料與化工（085600）總分338
已經(jīng)有4人回復
-
085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
求材料調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復
-
294求調(diào)劑材料與化工專碩
已經(jīng)有5人回復
-
一志愿華中科技大學，080502，354分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
一志愿吉林大學材料學碩321求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以）
已經(jīng)有3人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 利用別人的分析方法來分析自己的實驗結(jié)果算不算抄襲？
已經(jīng)有12人回復
- TEM自帶軟件給出的結(jié)果怎么分析
已經(jīng)有11人回復
- 急求幫助我翻譯成中文
已經(jīng)有1人回復
- 做WB實驗，關(guān)于抗體的選擇？
已經(jīng)有5人回復
- 盡快找回ISIS密碼，登陸查詢基金結(jié)果
已經(jīng)有52人回復
- 求高手分析WB結(jié)果��！
已經(jīng)有3人回復
- 【求助/交流】wb時β-actin加完發(fā)光液不發(fā)光？
已經(jīng)有4人回復
- 【求助/交流】WB老做不出來
已經(jīng)有6人回復
- WORD使用STYLEREF插入頁眉時 本來是腳標的結(jié)果在頁眉上顯示不出，怎么辦？
已經(jīng)有13人回復
- 【求助/交流】請教一下，如果做通道蛋白的免疫熒光和WB選哪家的抗體最好
已經(jīng)有5人回復
- 【求助】拉伸實驗結(jié)果怎么分析
已經(jīng)有7人回復
- NCBI blast 結(jié)果一些參數(shù)的含義求高手指點
已經(jīng)有12人回復
314300420
捐助貴賓 (著名寫手)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 16 (小學生)
- 金幣: 2193.1
- 散金: 2458
- 紅花: 17
- 帖子: 1447
- 在線: 511.5小時
- 蟲號: 851254
- 注冊: 2009-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
silicare(金幣+3, EPI+1): 2011-05-20 17:03:51
silicare(金幣+3, EPI+1): 2011-05-20 17:03:51
|
先將SDS-PAGE跑的好看點(考馬斯亮藍染色)，轉(zhuǎn)膜后用立春紅染色(可以將結(jié)果掃描存著)，觀察和考染的效果是否相當，最好把圖貼上來會更直觀些。 另外聽樓主的意思，是沒有做過預實驗吧？抗體說明書給的建議稀釋度都是一個范圍，沒有什么通用的稀釋度的，不同的細胞(組織)相同蛋白的表達量也是不一樣的，最好先做預實驗，摸好合適的抗體濃度再做整張膜的正式實驗。 附件里面有我做過實驗的圖片，可做為質(zhì)控參考，  |
乖乖寶貝7樓2011-05-19 21:47:44
happy-j
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 202.5
- 散金: 10
- 帖子: 91
- 在線: 51.9小時
- 蟲號: 830945
- 注冊: 2009-08-19
- 專業(yè): 食品科學
2樓2011-05-18 21:37:46
314300420
捐助貴賓 (著名寫手)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 16 (小學生)
- 金幣: 2193.1
- 散金: 2458
- 紅花: 17
- 帖子: 1447
- 在線: 511.5小時
- 蟲號: 851254
- 注冊: 2009-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+6): 感謝參與，歡迎常來 2011-05-19 13:37:07
happy-j(金幣+1): 第一次發(fā)帖求助，非常感謝提供解決意見。 2011-05-19 20:29:08
lstt09nk(金幣+6): 感謝參與，歡迎常來 2011-05-19 13:37:07
happy-j(金幣+1): 第一次發(fā)帖求助，非常感謝提供解決意見。 2011-05-19 20:29:08
|
內(nèi)參的抗體是不是回收使用了？現(xiàn)在天氣比較熱，抗體容易失活效價變低，而且會產(chǎn)生雜點和高背景，建議不要回收。根據(jù)你內(nèi)參的結(jié)果分析，主要原因就是熒光強度低，可提高抗體濃度，另外使用的發(fā)光液的敏感性很重要，好的ECL發(fā)光液可以節(jié)省抗體，降低背景值，Millipore的效果很不錯（貨號WBKLS0500）。 第二張圖的結(jié)果，分析認為是上樣量過大，100ug/泳道，已經(jīng)過載，超過了凝膠的分辨率，相鄰孔的蛋白已經(jīng)連在一起了，效果和沒有梳子是一樣的。你可以看看100ug的上樣量，考馬斯亮藍染色的結(jié)果是什么樣的，再對比下20ug的上樣量是什么效果。 |
3樓2011-05-19 09:41:41
天涯蕭客
金蟲 (正式寫手)
放羊大叔
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1038.3
- 散金: 15
- 帖子: 353
- 在線: 166.2小時
- 蟲號: 756987
- 注冊: 2009-04-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學
4樓2011-05-19 11:33:40
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +3 | xbxudjdn 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +4 | 冬十三 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[教師之家] 焦慮 +8 | 水冰月月野兔 2026-03-13 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +4 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +12 | 小熊joy 2026-03-14 | 13/650 |
|
|
|
[考研]
 0854，計算機類招收調(diào)劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +9 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研化學學碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學，080500材料科學與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調(diào)劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
投稿問題
 5+4
|
星光燦爛xt 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0817化學工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|