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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 求助微生物問題
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caojinxuan銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助微生物問題
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請教各位一個問題，提取細菌基因組所用的菌液的OD600值需要在什么范圍？ 我的菌液的OD600剛剛過1.5，還能用來進行基因組提取嗎？ |
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2樓2011-05-22 18:05:50
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4樓2011-05-23 01:46:47
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13樓2011-05-26 00:19:14
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金幣+5, EPI+1): 解答的很詳細！�。� 2011-05-28 17:25:21
rainwander(金幣+5, EPI+1): 解答的很詳細！�。� 2011-05-28 17:25:21
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回版主：菌死了，DNA不一定在，雖然被釋放到培養(yǎng)液中，但同時很多關于細胞自溶的蛋白質(zhì)也一樣被釋放，所以DNA也會被降解的，至于降解到什么程度就很難說了。同理，細胞碎片垃圾一大堆，這時候提取DNA就難說了，雖然說有試劑盒之類的東西，但是提取效率和提取到的DNA片段好不好，純不純，就給實驗結(jié)果增加了變數(shù)。也許你提取過，你知道 對于 hanguorui110 的回復，我想補充如下： 不同的細菌其生長期最高所能達到的OD值是不同的，有的能超過2，有的可能連0.2都達不到，說不準樓主的菌OD值在多少的時候就處于對數(shù)期。 樓主用的波長是600，hanguorui110用的波長是540，不知道是不是無論是600還是540，最佳的測量值都是在0.2~0.8之間？hanguorui110的表格文件里，OD540測定得到1.4，經(jīng)過2倍稀釋之后得到0.7，乘以2之后還是1.4，說明在540nm下的線性范圍可以達到1.4，而不是“最佳的測量值都是在0.2~0.8之間”。 稀釋的意思是當樣品的吸光值超過線性讀數(shù)范圍的時候，用溶液來稀釋，這個溶液應該用樓主的培養(yǎng)基，不能用水，因為培養(yǎng)基本身也可能會有有顏色的物質(zhì)。 hanguorui110用的是DNS法測定還原糖（葡萄糖），每個測定用濃度只有一個操作平行，沒有標準偏差，應該要設定三個平行，計算標準偏差。 DNS需要在堿性環(huán)境下才能與還原糖起反應，實際上在測定酶降解底物產(chǎn)生還原糖的時候，酶的反應環(huán)境里需要用緩沖液保持一定的pH值（如檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液），酶液里也可能存在其它化合物消耗氫氧化鈉（如疏水層析之后收集液里含有硫酸銨），嚴重的時候會最終使得pH值不為堿性，所以表格文件里的“3mL DNS 相應與5mg葡萄糖反應，即0.5mLDNS能與0.83mg葡萄糖（還原糖反應）”里的“0.83mg葡萄糖”在測定酶活力的時候就不一定了，可能明明有葡萄糖，但就是測定不出來。另外葡萄糖和還原糖不對等，葡萄糖和麥芽糖都是還原糖，同樣是有一個還原性末端，但分子量不一樣。 終于打完了 |
15樓2011-05-26 20:00:51
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16樓2011-05-26 20:09:20
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