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chuey木蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助微生物琥珀酸脫氫酶測定問題
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| 到底怎么處理啊，是要上清液還是沉淀啊。線粒體怎么破碎啊 ？ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金幣+5, MicEPI+1): 強大，學習了 2011-10-11 20:56:17
scelab(金幣+5, MicEPI+1): 強大，學習了 2011-10-11 20:56:17
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線粒體測定SDH可以用磷酸緩沖液破碎，pH就用SDH測定反應液的pH即可，一般為pH7.5。就用100 mM的KH2PO4-NaOH冰浴懸浮，超聲破碎。一般50-100次超聲，每次3sec，間隔5sec。 若破碎液只是測定SDH，則可以再破碎后向其中加入2%的Tween-80，然后震蕩幾分鐘，這樣可以充分提取SDH。 SDH 測定需要細胞全液。SDH在細胞破碎液離心上清和細胞沉淀中 都有，都不能忽略。不信，你可以分別測定上清和沉淀的SDH活性看看。 |
2樓2011-10-11 20:07:31
chuey
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6樓2011-10-13 00:14:55
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