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[求助]
【求助】有關(guān)測細(xì)胞凋亡實驗的問題
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我想請問下，做細(xì)胞凋亡實驗，我想測以下幾個指標(biāo)，線粒體膜電位改變，cytc的釋放，capase-3,9的活性，為了使試驗方法更豐富，我是不是應(yīng)該盡量避免試驗方法的重復(fù)呢?比如說 線粒體膜電位檢測可以用流式細(xì)胞儀，還可以JC-1染色再熒光鏡檢； cytc可以用流式和wb； caspase-3,9可以wb； 所以我打算設(shè)計成膜電位用JC-1，cytc流式，caspase用wb。但是有個問題是，cytc大多數(shù)都是用wb，極少數(shù)用流式，而膜電位很多用流式，很少用JC-1。那我為了試驗方法豐富這么做的話會不會有什么問題，比如實驗精確度之類的，而且我采用的方法會不會影響我以后發(fā)文章，還是只要那些重要的指標(biāo)檢測到了就好，方法哪一種都可以？ 實在是不知道如何定奪，希望高人指點��！謝謝~ |
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 分子生化實驗經(jīng)驗積累 | 【分子生物】EPI帖 |
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3樓2011-05-27 21:31:47
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-05-28 08:45:26
癟(金幣+2): 2011-05-28 16:02:53
dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-05-28 08:45:26
癟(金幣+2): 2011-05-28 16:02:53
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凋亡事件分為 "啟動期"、"凋亡早期"、"凋亡中期"和 "凋亡晚期"。從下圖中可見： 1) Caspase 酶的激活是凋亡最早期的事件。Caspase 酶激活后剪切一系列細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白、調(diào)節(jié)蛋白和 DNA 修復(fù)蛋白，引發(fā)隨后的凋亡事件； 2) 線粒體連接著若干個凋亡途徑，在凋亡中扮演著重要的角色。線粒體膜電位的喪失和細(xì)胞色素 c 從線粒體的釋放是線粒體被激活的兩個最顯著特征； 3) 細(xì)胞 PS(磷脂酰絲氨酸)的外翻緊隨線粒體膜電位的喪失而發(fā)生，這是細(xì)胞凋亡中期的最明顯標(biāo)志； 4) 核碎片的形成及 DNA在核小體連接處斷裂成低分子量的片段是細(xì)胞凋亡中晚期的標(biāo)志性特征。 選擇什么方法不是隨便選擇的，幾個指標(biāo)檢測不應(yīng)重復(fù)，方法的選擇應(yīng)該從各種角度準(zhǔn)確的反映細(xì)胞凋亡過程中的變化，每個時期可以選擇一種方法代表檢測。 |
4樓2011-05-27 22:09:48
5樓2013-04-04 19:58:15
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