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biofeixue木蟲 (著名寫手)
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[求助]
DEPC水配制及用器烘問題？
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DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在雙蒸水中加入DEPC,不攪拌，讓它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，這種方法效果好嗎？用前再滅菌，能把RNAase 滅活嗎？ 用０.１%的DEPC水泡過的槍頭后，把盛槍頭的瓶子中的水倒干凈，但有時很全部倒干凈，因為怕DEPC水有毒，最后，在滅菌后總是看到里面還有一些水，請問我能不能在烘干時，把瓶口包有報紙的瓶子倒過來烘干？ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
biofeixue(金幣+5): 請問你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次嗎？另外若烘2天不會有細菌進去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
biofeixue(金幣+5): 請問你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次嗎？另外若烘2天不會有細菌進去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
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DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式為C6H10O5，分子量為162.14，無色、澄清透明的液體。是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。 DEPC不穩(wěn)定，在水溶液中會分解成乙醇和二氧化碳， 25℃、磷酸緩沖液中其半衰期為4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。在水中的半衰期約為30min。 這個別說你提前讓它溶上3天，提前溶3小時都值得商榷。但是經(jīng)典實驗手冊上都是說浸泡過夜或12小時的。。。。這個確實有點小不理解 使用前高溫降解DEPC。。。。這個問題不大，但是實際情況是即使你水倒的很干，滅完在60℃烘干也要2天左右才能徹底干。 水會把紙弄濕，外界RNase有機會污染 PS：但凡你自己覺得試驗有問題的話，基本上它就是真的有問題。做一個嚴格的實驗，真的很難。 |
2樓2011-05-30 04:48:26
biofeixue
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