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biofeixue木蟲 (著名寫手)
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[求助]
DEPC水配制及用器烘問題？
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DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在雙蒸水中加入DEPC,不攪拌，讓它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，這種方法效果好嗎？用前再滅菌，能把RNAase 滅活嗎？ 用０.１%的DEPC水泡過的槍頭后，把盛槍頭的瓶子中的水倒干凈，但有時(shí)很全部倒干凈，因?yàn)榕翫EPC水有毒，最后，在滅菌后總是看到里面還有一些水，請(qǐng)問我能不能在烘干時(shí)，把瓶口包有報(bào)紙的瓶子倒過來烘干？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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5樓2011-06-01 13:48:32
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【答案】應(yīng)助回帖
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biofeixue(金幣+5): 請(qǐng)問你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次嗎？另外若烘2天不會(huì)有細(xì)菌進(jìn)去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
biofeixue(金幣+5): 請(qǐng)問你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次嗎？另外若烘2天不會(huì)有細(xì)菌進(jìn)去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
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DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式為C6H10O5，分子量為162.14，無色、澄清透明的液體。是一種強(qiáng)烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。 DEPC不穩(wěn)定，在水溶液中會(huì)分解成乙醇和二氧化碳， 25℃、磷酸緩沖液中其半衰期為4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。在水中的半衰期約為30min。 這個(gè)別說你提前讓它溶上3天，提前溶3小時(shí)都值得商榷。但是經(jīng)典實(shí)驗(yàn)手冊(cè)上都是說浸泡過夜或12小時(shí)的。。。。這個(gè)確實(shí)有點(diǎn)小不理解 使用前高溫降解DEPC。。。。這個(gè)問題不大，但是實(shí)際情況是即使你水倒的很干，滅完在60℃烘干也要2天左右才能徹底干。 水會(huì)把紙弄濕，外界RNase有機(jī)會(huì)污染 PS：但凡你自己覺得試驗(yàn)有問題的話，基本上它就是真的有問題。做一個(gè)嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)，真的很難。 |
2樓2011-05-30 04:48:26
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3樓2011-05-30 05:56:23
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4樓2011-05-30 10:42:27
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