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zqh2912新蟲 (初入文壇)
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[求助]
噬菌體淘選之后做ELISA沒(méi)結(jié)果的問(wèn)題
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| 我現(xiàn)在做的是用噬菌體展示技術(shù)直接淘選硫酸軟骨素,以期得到與硫酸軟骨素的結(jié)合肽以作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)在一共進(jìn)行了5輪淘選(一般而言,3輪就夠了)從洗脫物的滴度來(lái)看,有富集表現(xiàn),但是也不算明顯(1此方,2此方,2此方,3此方)。不過(guò)每輪擴(kuò)增后的滴度都能在10的11此方級(jí)別,F(xiàn)在的問(wèn)題是,用這樣的淘選物去做ELISA,與對(duì)照相比沒(méi)有結(jié)果。其中:1,硫酸軟骨素是一個(gè)黏多糖,不太好包被,但是也有文獻(xiàn)說(shuō)明可以包被上去。2,做ELISA時(shí)都有陽(yáng)性對(duì)照,所以可以排除手法問(wèn)題。而我的問(wèn)題是:1,為什么都是包被相同的分子,洗脫液及封阻液都相同,但是經(jīng)淘選得出的洗脫物卻不能通過(guò)ELISA檢驗(yàn)?2,如果淘選出的是非特異性的,那么這些Phage是和什么結(jié)合了,是BSA封阻液還是就是96微孔板?3,如何解決現(xiàn)在的問(wèn)題?謝謝各位大蝦指導(dǎo)哈~ |
新蟲 (初入文壇)


新蟲 (初入文壇)
| 謝謝!但是我也是這么想的,所以嚴(yán)格了條件,然后在嚴(yán)格條件之下得到的便被理解為了特異性的(因?yàn)槲蚁敕翘禺愋缘臒o(wú)法通過(guò)更嚴(yán)格的條件),但是現(xiàn)在師姐的意思是,無(wú)論嚴(yán)格與非嚴(yán)格,事實(shí)上都會(huì)有phage留下,而嚴(yán)格的后果是可能將潛在的特異性phage去除,產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。而我后面又做了一次未包被靶分子的空白對(duì)照,確實(shí)仍然有phage留下,但是比例為正常組百分之一,當(dāng)然經(jīng)過(guò)擴(kuò)增后其滴度會(huì)極大的提高,但是仍然有矛盾之處。另外,請(qǐng)問(wèn)如何提高特異性的? |
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