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zqh2912新蟲 (初入文壇)
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[求助]
噬菌體淘選之后做ELISA沒結(jié)果的問題
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| 我現(xiàn)在做的是用噬菌體展示技術(shù)直接淘選硫酸軟骨素，以期得到與硫酸軟骨素的結(jié)合肽以作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)�，F(xiàn)在一共進(jìn)行了5輪淘選（一般而言，3輪就夠了）從洗脫物的滴度來看，有富集表現(xiàn)，但是也不算明顯（1此方，2此方，2此方，3此方）。不過每輪擴(kuò)增后的滴度都能在10的11此方級(jí)別。現(xiàn)在的問題是，用這樣的淘選物去做ELISA，與對(duì)照相比沒有結(jié)果。其中：1，硫酸軟骨素是一個(gè)黏多糖，不太好包被，但是也有文獻(xiàn)說明可以包被上去。2，做ELISA時(shí)都有陽性對(duì)照，所以可以排除手法問題。而我的問題是：1，為什么都是包被相同的分子，洗脫液及封阻液都相同，但是經(jīng)淘選得出的洗脫物卻不能通過ELISA檢驗(yàn)？2,如果淘選出的是非特異性的，那么這些Phage是和什么結(jié)合了，是BSA封阻液還是就是96微孔板？3，如何解決現(xiàn)在的問題？謝謝各位大蝦指導(dǎo)哈~ |
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zqh2912
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| 謝謝！但是我也是這么想的，所以嚴(yán)格了條件，然后在嚴(yán)格條件之下得到的便被理解為了特異性的（因?yàn)槲蚁敕翘禺愋缘臒o法通過更嚴(yán)格的條件），但是現(xiàn)在師姐的意思是，無論嚴(yán)格與非嚴(yán)格，事實(shí)上都會(huì)有phage留下，而嚴(yán)格的后果是可能將潛在的特異性phage去除，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。而我后面又做了一次未包被靶分子的空白對(duì)照，確實(shí)仍然有phage留下，但是比例為正常組百分之一，當(dāng)然經(jīng)過擴(kuò)增后其滴度會(huì)極大的提高，但是仍然有矛盾之處。另外，請(qǐng)問如何提高特異性的？ |
5樓2011-06-17 10:32:52
2樓2011-06-01 03:21:04
zqh2912
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3樓2011-06-02 09:18:04
4樓2011-06-11 13:39:00
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