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[求助]
噬菌體淘選之后做ELISA沒結果的問題
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| 我現(xiàn)在做的是用噬菌體展示技術直接淘選硫酸軟骨素，以期得到與硫酸軟骨素的結合肽以作進一步的實驗�，F(xiàn)在一共進行了5輪淘選（一般而言，3輪就夠了）從洗脫物的滴度來看，有富集表現(xiàn)，但是也不算明顯（1此方，2此方，2此方，3此方）。不過每輪擴增后的滴度都能在10的11此方級別�，F(xiàn)在的問題是，用這樣的淘選物去做ELISA，與對照相比沒有結果。其中：1，硫酸軟骨素是一個黏多糖，不太好包被，但是也有文獻說明可以包被上去。2，做ELISA時都有陽性對照，所以可以排除手法問題。而我的問題是：1，為什么都是包被相同的分子，洗脫液及封阻液都相同，但是經(jīng)淘選得出的洗脫物卻不能通過ELISA檢驗？2,如果淘選出的是非特異性的，那么這些Phage是和什么結合了，是BSA封阻液還是就是96微孔板？3，如何解決現(xiàn)在的問題？謝謝各位大蝦指導哈~ |
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