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大家評論下這個不倫不類的銀染方法
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銀染法分為強(qiáng)堿法和弱堿法，我用師姐之前做過的方法，具體描述如下，大家評論下這個不倫不類的方法（既非強(qiáng)堿法亦非弱堿法啊，傷不起呀） 電泳后采用銀染的方法，銀染[12]主要步驟：(1)去離子水洗脫3min；(2)10%乙酸固定10min；(3)去離子水洗脫2min；(4)銀染15min(0.1%AgNO3)；(5)去離子水洗脫0.5min；(6)顯影液脫色6min（16gNaOH， 8ml37%甲醛溶液，用ddH2O定溶至1L）；(7)10%乙酸固定1min；(8)去離子水洗脫，最后用相機(jī)或是在凝膠成像系統(tǒng)中拍照。 PS：順便問下，甲醛的作用是什么？一般要加多少量？還有，弱堿法底色是淺，但會不會造成條帶分辨率不是很好呢？ 小女子這廂謝過大家(*^__^*) 嘻嘻 |
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xiadongliang
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【答案】應(yīng)助回帖
墨池(金幣+1): 2011-06-03 20:32:32
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1. 用固定液（乙醇 50 mL，冰醋酸2.5 mL，定容500 mL）固定15 min 2. Milli-Q純水清洗，20 s和2 min各一次 3. 銀染液（硝酸銀1 g，37%甲醛0.75 mL，定容500 mL）染色15 min 4. Milli-Q純水清洗，20 s和2 min各一次 5. 顯色液（氫氧化鈉7.5 g，37%甲醛2.5 mL，定容500 mL）顯色5-7 min 6. 最后用終止液（乙醇50 mL，冰醋酸2.5 mL，定容500 mL）終止反應(yīng) |
4樓2011-06-03 13:59:38
maizecotton
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2樓2011-06-03 12:45:15
xiadongliang
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 歡迎應(yīng)助。能否順便回答下樓主順便問的問題呢，嘿嘿 2011-06-03 18:31:39
墨池(金幣+1): 2011-06-03 20:32:37
西瓜(金幣+3): 歡迎應(yīng)助。能否順便回答下樓主順便問的問題呢，嘿嘿 2011-06-03 18:31:39
墨池(金幣+1): 2011-06-03 20:32:37
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1. 固定液（乙醇 50 mL，冰醋酸2.5 mL）固定15 min 2. Milli-Q純水清洗，20 s和2 min各一次 3. 銀染液（硝酸銀1 g，37%甲醛0.75 mL）染色15 min 4. Milli-Q純水清洗，20 s和2 min各一次 5. 顯色液（氫氧化鈉7.5 g，37%甲醛2.5 mL）顯色5-7 min 6. 最后用終止液（乙醇50 mL，冰醋酸2.5 mL）終止反應(yīng) |
3樓2011-06-03 13:58:22
terry130
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+4): Good！ 2011-06-03 18:36:30
墨池(金幣+1): 2011-06-03 20:32:27
西瓜(金幣+4): Good！ 2011-06-03 18:36:30
墨池(金幣+1): 2011-06-03 20:32:27
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下面是我們實驗室用的印染protocol，很好用，給你做參考 Fresh Solutions： 0.02% Sodium Thiosulfate (Na2S2O3) 0.1% AgNO3 for minigel and 0.15% for large gel. Stored in 4ºC before use. 2% Na2CO3 + 0.04% formaldehide. Prepare fresh. Note: Wear clean gloves when handling all materials. Take special care to touch only the same corner of the gel to prevent staining artifact. Clean glasses very carefuly when preparing the gel. Place gel in clean glass container before staining Staining steps (for minigels). Every step needs gently shaking. Fixation: 200ml 50% methanol + 5% acetic acid for 20min or ON (1 hour for large gels). Rinse 1: 200ml 50% methanol for 10min (20min for large gels). Rinse 2: 200ml H2O for 10min (15min for large gels). Sensitization: 200ml 0.02% Na2S2O3 1min. Rinse:H2O 2 x 1min. Stain: 200ml chilled 0.1% AgNO3 for minigel (0.15% for large gel) for 20min. Keep from light. Rinse: H2O 2 x 1min. Develop: 2% Na2CO3 + 0.04% formaldehide with intensive shaking. After 20-30 seconds (solution turns yellow), replace it with new develop solution. Develop to the degree you want. You can change develop solution again after 2-3minutes. Stop: 5% acetic acid 2 x 3min. Store: 1% acetic acid at 4ºC, or rinse gel with same solution and then with H2O. If you need material for Mass Spectrometry cut the bands and store in 1.5ml plastic tubes at 4ºC. |
5樓2011-06-03 16:21:15
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