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worm2010金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助！請(qǐng)問(wèn) NdeI 和EcoRI 同時(shí)做酶切可以嗎？
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用的是寶生物的這兩種酶 但是目錄上沒有查到關(guān)于二者同時(shí)酶切的詳細(xì)資料 求助有經(jīng)驗(yàn)的兄弟姐妹們，這兩種酶可以同時(shí)切嗎？切幾個(gè)小時(shí) 比較好呢? 一般雙酶切DNA什么條件比較合適？（時(shí)間上） 平末端的連接條件是指什么？4度過(guò)夜？ |
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worm2010
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4樓2011-06-05 18:45:43
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【答案】應(yīng)助回帖
worm2010(金幣+2): 2011-06-05 18:41:47
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網(wǎng)上有很多關(guān)于雙酶切共用的反應(yīng)緩沖液的表，你查一下，可以發(fā)現(xiàn)兩個(gè)酶的通用緩沖液是1xH buffer，再看一下兩個(gè)酶的說(shuō)明書，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%，那么就把兩個(gè)酶的酶切體系里的物質(zhì)加到一起就行了，剩下的用水補(bǔ)到20微升，你也可以根據(jù)需要等比例放大。 反應(yīng)時(shí)間2小時(shí)夠了，如果覺得不放心可以加長(zhǎng)時(shí)間，但不要超過(guò)4小時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間會(huì)造成錯(cuò)誤切割。 酶切之后都是粘性末端，用solution 1連接，16度過(guò)夜。 |
2樓2011-06-05 17:56:00
worm2010
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3樓2011-06-05 18:42:08
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