 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1796 | 回復(fù): 3 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
[求助]
熒光定量Q-PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線優(yōu)化問(wèn)題
|
||
|
做了兩鍋梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)曲線 早上的那鍋發(fā)現(xiàn)后面三個(gè)低濃度梯度的基本不出峰，或者峰很低 于是下午就從10倍稀釋變?yōu)?倍稀釋 但是結(jié)果顯示曲線的擬合度不好R值從早上的0.94講到0.76了，擴(kuò)增效率增加了20%； 同時(shí)重復(fù)性像是也沒(méi)有早上的好， 想問(wèn)問(wèn)，一條標(biāo)準(zhǔn)曲線7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋梯度夠嗎？ 加完樣，是否要對(duì)8聯(lián)管進(jìn)行輕微離心？ 天根的試劑盒上沒(méi)寫(xiě)溶解曲線步驟的溫度程序，設(shè)為 Melt Curve 65.0 to 95.0 C, increment 0.5 C, 0:05 + Plate Read 是否最佳？ 下一步也不知道怎么調(diào)整了 謝謝大牛了  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
265求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章
已經(jīng)有21人回復(fù)
-
295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
0856調(diào)劑，是學(xué)校就去
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
298-一志愿中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料學(xué)碩297已過(guò)四六級(jí)求調(diào)劑推薦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
295復(fù)試調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
本人考085602 化學(xué)工程 專碩
已經(jīng)有20人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 救命��！熒光定量PCR 擴(kuò)增問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 熒光定量曲線問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 不解的問(wèn)題，q-PCR結(jié)果分析。
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 標(biāo)準(zhǔn)菌株建立熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量pcr出現(xiàn)直線擴(kuò)增曲線，求指導(dǎo)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】求助，關(guān)于熒光定量PCR問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量PCR引物跨內(nèi)含子的問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量PCR中組織保存問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】實(shí)時(shí)熒光定量pcr的問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
adslye
銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 10
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 貴賓: 0.244
- 金幣: 364.9
- 散金: 766
- 紅花: 6
- 帖子: 514
- 在線: 119.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 845336
- 注冊(cè): 2009-09-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 流行病學(xué)方法與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
silicare(金幣+3, EPI+1): 2011-06-10 12:20:50
churmi(金幣+5): 2011-06-13 21:58:25
silicare(金幣+3, EPI+1): 2011-06-10 12:20:50
churmi(金幣+5): 2011-06-13 21:58:25
|
1. 5個(gè)點(diǎn)足夠了，但是不能少于5個(gè)。R值不能低于0.998 ，否則文章不收。其實(shí)這個(gè)R值很好做到的。我都是加96孔板，同是做幾條標(biāo)曲，用來(lái)測(cè)擴(kuò)增效率。只要每步注意分裝混勻就沒(méi)問(wèn)題，自己先規(guī)劃好。 2.加完樣最好離心，因?yàn)?連管在你蓋帽子的時(shí)候往往會(huì)濺起液滴。 3.溶解曲線程序不是試劑盒決定的，是機(jī)器決定的。你機(jī)器能支持多高的精度，你實(shí)驗(yàn)需要多高的精度。比如：你如果想知道最后產(chǎn)物的TM精確到0.1°，那你就調(diào)0.1°采一次數(shù)據(jù)，只要你機(jī)器能做到。 4.你的實(shí)驗(yàn)，我建議先在紙上把加樣過(guò)程寫(xiě)好，每步加什么，怎么加，加多少。另外，少量的比如：引物模板一定不要一次次加，要大量加然后分裝，否則R值很難達(dá)到。每個(gè)設(shè)3個(gè)平行。最后，提醒下，要先排除你稀釋產(chǎn)物的操作沒(méi)問(wèn)題，也就是梯度模板沒(méi)問(wèn)題。 |
2樓2011-06-09 13:31:16
鬼娃娃不要天
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2.8
- 散金: 5
- 帖子: 21
- 在線: 14.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1131251
- 注冊(cè): 2010-10-25
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2011-06-10 10:46:10
4樓2011-06-13 21:59:53
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 churmi 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286分人工智能專業(yè)請(qǐng)求調(diào)劑愿意跨考！ +3 | lemonzzn 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +5 | 脫穎而出 2026-03-16 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +3 | sbdksD 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 320求調(diào)劑0856
+3
|
不想起名字112 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +10 | 慕寒mio 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 305求調(diào)劑 +4 | FY_yy 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑 +4 | 守候夕陽(yáng)CF 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機(jī)化學(xué) +7 | ZY-05 2026-03-13 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | △小透明* 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +11 | zjl的號(hào) 2026-03-16 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 太陽(yáng)花天天開(kāi)心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑 可跨專業(yè) +3 | 626776879 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|