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p120933799金蟲 (小有名氣)
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[求助]
DNA溶解小問
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| 我用CTAB方法提取真菌DNA，基本上是嚴(yán)格按照操作，可最后加TE后總有不溶解透明物質(zhì)，在65℃下也不溶解，請問為何？如何可避免，以往也遇到很多這種情況， |
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- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
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CTAB法太繁瑣了，看我的 2.4.14.1真菌總DNA的提取 （1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天； （2）用滅菌紗布過濾，并壓干菌體； （3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預(yù)冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀； （4）將粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等體積苯酚/氯仿，輕輕倒轉(zhuǎn)混合，10000rpm離心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重復(fù)步驟（5）； （7）取上清液，加入兩倍體積無水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 離心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）電泳檢測總DNA的濃度。 （5）DNA抽提液的配置 表 2.5 DNA抽提液的配置 成分 濃度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L |
3樓2011-06-14 21:33:42
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