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Juliana芷蕊金蟲 (小有名氣)
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[求助]
紫外分光光度法測的吸光值怎么轉化為酶反應初速度呢?
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如題,我是用紫外光度法中的動力學測木素過氧化物酶(Lip)的酶活, (測定方法: 取0.6 mL待測酶液,同時加入0.6 mL的10 mmol/L藜蘆醇溶液,1.8 mL的酒石酸緩沖液(pH=3.0) 250 mmol/L,用0.03 mL,40 mmol/L的H2O2啟動反應,總體積3.0 mL,25 ℃反應3 min,在310 nm(ε310=9300 mol-1cm-1)波長下測定吸光度的變化。同反應體系做空白樣為不加入H2O2啟動反應。一個酶活力單位(U)定義為每分鐘氧化藜蘆醇產生1 μmol藜蘆醛所需的酶量。) 問題是我測的曲線吸光度變化不大,而且各段的斜率不一,這樣在計算酶活時選線性部分我就很困惑,不知道怎么選點比較好,平行樣之間的平行性也不好,還有就是通過吸光度變化怎么轉化成反應初速度呢?我做的是酶催化動力學,做動力學對條件要求是不是很苛刻呢?現(xiàn)在瀕臨崩潰,忠心希望各位師長能給些提點,小妹不勝感激。 |

銅蟲 (正式寫手)
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