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Juliana芷蕊金蟲 (小有名氣)
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[求助]
紫外分光光度法測的吸光值怎么轉(zhuǎn)化為酶反應(yīng)初速度呢？
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如題，我是用紫外光度法中的動(dòng)力學(xué)測木素過氧化物酶（Lip）的酶活， （測定方法： 取0.6 mL待測酶液，同時(shí)加入0.6 mL的10 mmol/L藜蘆醇溶液，1.8 mL的酒石酸緩沖液（pH=3.0） 250 mmol/L，用0.03 mL，40 mmol/L的H2O2啟動(dòng)反應(yīng)，總體積3.0 mL，25 ℃反應(yīng)3 min，在310 nm（ε310=9300 mol-1cm-1）波長下測定吸光度的變化。同反應(yīng)體系做空白樣為不加入H2O2啟動(dòng)反應(yīng)。一個(gè)酶活力單位（U）定義為每分鐘氧化藜蘆醇產(chǎn)生1 μmol藜蘆醛所需的酶量。） 問題是我測的曲線吸光度變化不大，而且各段的斜率不一，這樣在計(jì)算酶活時(shí)選線性部分我就很困惑，不知道怎么選點(diǎn)比較好，平行樣之間的平行性也不好，還有就是通過吸光度變化怎么轉(zhuǎn)化成反應(yīng)初速度呢？我做的是酶催化動(dòng)力學(xué)，做動(dòng)力學(xué)對條件要求是不是很苛刻呢？現(xiàn)在瀕臨崩潰，忠心希望各位師長能給些提點(diǎn)，小妹不勝感激。 |
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majiangshan
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