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fjaxwyc木蟲 (正式寫手)
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[求助]
HPLC測(cè)定苯甲醇和苯甲醛混合樣，如何確定流動(dòng)相？
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各位大俠，小弟要用HPLC測(cè)一系列含不同濃度苯甲醛的苯甲醇樣，請(qǐng)問要如何設(shè)定流動(dòng)相，我們實(shí)驗(yàn)室的待選溶劑有乙腈、甲醇和水。另外紫外波長(zhǎng)設(shè)什么好呢？由于小弟是初次接觸HPLC，幾乎什么都不懂，謝謝各位了 [ Last edited by fjaxwyc on 2011-6-23 at 18:56 ] |
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zgf340631735
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2樓2011-06-23 18:57:33
fjaxwyc
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3樓2011-06-23 19:14:11
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4樓2011-06-23 21:56:05
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這種東西都是先查文獻(xiàn)，在文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上調(diào)整。如果查不到，那就自己摸索建立。 我說反相方法 首先你的苯甲醇、苯甲醛都是弱酸性物質(zhì)，流動(dòng)相的pH最好小于他們的pka兩個(gè)單位以上，使他們保持分子狀態(tài)，一般流動(dòng)相鹽的濃度在25mmol/ml比較好，剛開始不要加三乙胺、離子對(duì)試劑等試劑，在調(diào)整流動(dòng)相未能起到很好的作用時(shí)再考慮加不加。 色譜柱選擇150mm的柱子，流速為1.5ml/min 。因?yàn)橐话愕某Ｒ?guī)分析液相的流速范圍為0.5~2.0ml/min。太高或太低對(duì)做方法學(xué)耐用性有影響。建立分析方法可以考慮讓其快些出峰， 檢測(cè)波長(zhǎng)有分析物的紫外吸收波長(zhǎng)決定。兩種成分選波長(zhǎng)時(shí)要兼顧兩個(gè)物質(zhì)都能準(zhǔn)確檢測(cè)。并非一定要選擇最大吸收波長(zhǎng)。 你的兩個(gè)分析物都是強(qiáng)極性物質(zhì)，如果用反相液相色譜，初始的有機(jī)相比例別太高了，從較低的比例開始，例如20%。 另外告訴你一個(gè)有用的經(jīng)驗(yàn)：一般來說當(dāng)你的有機(jī)相比例降低10%，物質(zhì)的保留時(shí)間會(huì)增加三倍。 柱溫建議30度。不要選擇環(huán)境溫度即不控制柱溫。因?yàn)椴煌牡攸c(diǎn)，不同的時(shí)間環(huán)境溫度可能不一樣，甚至存在較大差別�？赡軙�(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性造成干擾。  |
5樓2012-05-27 02:08:29
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6樓2012-07-01 11:00:05
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