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fjaxwyc木蟲 (正式寫手)
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[求助]
HPLC測定苯甲醇和苯甲醛混合樣，如何確定流動相？
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各位大俠，小弟要用HPLC測一系列含不同濃度苯甲醛的苯甲醇樣，請問要如何設定流動相，我們實驗室的待選溶劑有乙腈、甲醇和水。另外紫外波長設什么好呢？由于小弟是初次接觸HPLC，幾乎什么都不懂，謝謝各位了 [ Last edited by fjaxwyc on 2011-6-23 at 18:56 ] |
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這種東西都是先查文獻，在文獻的基礎上調整。如果查不到，那就自己摸索建立。 我說反相方法 首先你的苯甲醇、苯甲醛都是弱酸性物質，流動相的pH最好小于他們的pka兩個單位以上，使他們保持分子狀態(tài)，一般流動相鹽的濃度在25mmol/ml比較好，剛開始不要加三乙胺、離子對試劑等試劑，在調整流動相未能起到很好的作用時再考慮加不加。 色譜柱選擇150mm的柱子，流速為1.5ml/min 。因為一般的常規(guī)分析液相的流速范圍為0.5~2.0ml/min。太高或太低對做方法學耐用性有影響。建立分析方法可以考慮讓其快些出峰， 檢測波長有分析物的紫外吸收波長決定。兩種成分選波長時要兼顧兩個物質都能準確檢測。并非一定要選擇最大吸收波長。 你的兩個分析物都是強極性物質，如果用反相液相色譜，初始的有機相比例別太高了，從較低的比例開始，例如20%。 另外告訴你一個有用的經驗：一般來說當你的有機相比例降低10%，物質的保留時間會增加三倍。 柱溫建議30度。不要選擇環(huán)境溫度即不控制柱溫。因為不同的地點，不同的時間環(huán)境溫度可能不一樣，甚至存在較大差別。可能會對實驗的重現性造成干擾。  |
5樓2012-05-27 02:08:29
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