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stteria銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求教SDS-PAGE問(wèn)題
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第一次,跑得很正常,但因?yàn)闃悠酚悬c(diǎn)降解了,所以只當(dāng)是練習(xí)了; 第二次,把樣品濃度從原來(lái)的6mg/ml降到4mg/ml(因?yàn)橘Y料中說(shuō)樣品濃度為4mg/ml),一切都很順利,但是卻沒(méi)跑出來(lái)?xiàng)l帶(溴酚藍(lán)是跑到底了,但是染色后發(fā)現(xiàn)分離膠里面只有溴酚藍(lán)跑過(guò)的軌跡后形成的一長(zhǎng)條帶,并沒(méi)有蛋白的小條帶); 第三次,以為是制膠過(guò)程有問(wèn)題,重新做了一遍,樣品還是原先4mg/ml處理好的樣品,結(jié)果跟第二次一樣。 是不是樣品有問(wèn)題?是濃度太低?還是還原液處理得不夠仔細(xì)(是在91-95度范圍內(nèi)加熱還原了9、10分鐘)?或者還有別的原因?請(qǐng)高人指教啊 [ Last edited by stteria on 2011-6-23 at 20:22 ] |
【分子生物】EPI帖 |
木蟲之王 (文學(xué)泰斗)
小元

至尊木蟲 (著名寫手)
鐵蟲 (初入文壇)
| 看Marker來(lái)判斷是不是膠的問(wèn)題,根據(jù)你的情況,濃度肯定是夠了,一個(gè)泳道1ug就可以很明顯,SDS-PAGE的分辨率在10ng,但是上樣量控制在4-5ug是比較合適的。根據(jù)你的情況,我估計(jì)是不是蛋白聚集,然后掛在膠孔上了,建議你用8M尿素把蛋白溶解,然后加點(diǎn)DTT,會(huì)有比較好的結(jié)果的,繼續(xù)努力! |
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