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韓俊

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跑了幾次電泳，跑出來(lái)的膠，總是靠近上樣一段沒(méi)有條帶，下面又有顯示了，而且Mark也只有5條（應(yīng)該有六條），最高分子量（97.4）的條帶不見(jiàn)了。有人跟我說(shuō)是灌注分離膠后，液封的時(shí)候，吧上層的分離膠稀釋了，所以高分子量就沒(méi)有分開(kāi)，造成上層一塊沒(méi)有條帶。

可是液封時(shí)候我已經(jīng)非常小心了，希望各位幫幫忙，分析分析原因，小弟不甚感激。

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1樓 2011-08-11 22:50:51

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西瓜

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會(huì)不會(huì)是最小的條帶跑出去了，所以看是5條帶？

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2樓2011-08-12 00:17:27

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shuanyu0202

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【答案】應(yīng)助回帖

上圖才好分析啊，建議上圖。

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3樓2011-08-12 15:06:03

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韓俊

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引用回帖:

3樓: Originally posted by shuanyu0202 at 2011-08-12 15:06:03:
上圖才好分析啊，建議上圖。

左上角沒(méi)有東西

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4樓2011-08-12 20:33:19

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2樓: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-12 00:17:27:
會(huì)不會(huì)是最小的條帶跑出去了，所以看是5條帶？

可能性不大，因?yàn)闃悠返臈l帶，分子量心里還是有數(shù)的

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5樓2011-08-12 20:34:28

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qingyuansw20

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【答案】應(yīng)助回帖

★
西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)下 2011-08-13 15:45:49

不能判斷是少了上面還是下面，請(qǐng)用彩色marker。這樣就很容易判斷。

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6樓2011-08-13 09:41:52

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-08-14 18:26:47

會(huì)不會(huì)是你配制的膠濃度不對(duì)，導(dǎo)致蛋白樣品沒(méi)有分離出來(lái)或分開(kāi)，膠濃度越大分離的蛋白分子量越小。
蛋白分子量    凝膠濃度
4-40                20%
12-45             15%
10-70                12.5%
15-100             10%
25-200                8%

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人有絕交，才有至交！

7樓2011-08-13 14:20:44

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 學(xué)習(xí)了！ 2011-08-13 15:46:36
韓俊(金幣+4): 謝謝你的詳細(xì)解答，受教了 2011-08-14 12:58:39

蛋白質(zhì)電泳影響因素非常多，我也提供一個(gè)想法，前提是你的各種藥品都沒(méi)有問(wèn)題，尤其是APS和TEMED，這兩個(gè)是導(dǎo)致膠凝固快慢的決定因素。
因?yàn)榭吹侥阏麎K膠都明顯有染色顏色了，我想，可能與你的膠不均勻有關(guān)系，也就是說(shuō)你下面的凝固得很快，但是上面的沒(méi)有凝，導(dǎo)致膠不均勻。由此形成的孔徑大小就不均勻，所以有些條帶沒(méi)有分開(kāi)。一般凝膠是20~30分鐘比較理想，我之前也搞得很暈，超過(guò)40分鐘往往膠就不均勻，跑出來(lái)的帶歪歪扭扭，有時(shí)也出現(xiàn)沒(méi)有條帶，凝膠時(shí)間太長(zhǎng)不僅會(huì)影響均勻性，甚至連網(wǎng)孔都無(wú)法形成，丙烯酰胺→聚丙烯酰胺是形成網(wǎng)孔的過(guò)程。
如果你懷疑是液封的影響，你不妨做個(gè)試驗(yàn)，即不液封，因?yàn)橐悍庵皇菫榱耸狗蛛x膠與積層膠之間的界限憑證，以保證跑出來(lái)的條帶是直線(xiàn)的（各樣同時(shí)向前）。

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8樓2011-08-13 14:49:04

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不液封并不會(huì)影響條帶的數(shù)目，因此，可以試試。

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9樓2011-08-13 14:50:51

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引用回帖:

8樓: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 14:49:04:
蛋白質(zhì)電泳影響因素非常多，我也提供一個(gè)想法，前提是你的各種藥品都沒(méi)有問(wèn)題，尤其是APS和TEMED，這兩個(gè)是導(dǎo)致膠凝固快慢的決定因素。
因?yàn)榭吹侥阏麎K膠都明顯有染色顏色了，我想，可能與你的膠不均勻有關(guān)系，也 ...

求教兩個(gè)問(wèn)題
1.那怎么樣防止這個(gè)不均勻呢？
2.經(jīng)常倒分離膠的時(shí)候會(huì)在小燒杯里剩下一點(diǎn)，但是往往板里的已經(jīng)凝結(jié)了，不過(guò)小燒杯里的還是不凝結(jié)，這是為什么？

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10樓2011-08-14 13:38:45

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