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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » SDS-PAGE電泳求助
| 查看: 2689 | 回復: 13 | |||
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韓俊金蟲 (正式寫手)
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[求助]
SDS-PAGE電泳求助
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跑了幾次電泳 ，跑出來的膠，總是靠近上樣一段沒有條帶，下面又有顯示了，而且Mark也只有5條（應該有六條），最高分子量（97.4）的條帶不見了。有人跟我說是灌注分離膠后，液封的時候，吧上層的分離膠稀釋了，所以高分子量就沒有分開，造成上層一塊沒有條帶。 可是液封時候我已經非常小心了，希望各位幫幫忙，分析分析原因，小弟不甚感激。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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西瓜
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2樓2011-08-12 00:17:27
shuanyu0202
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3樓2011-08-12 15:06:03
韓俊
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4樓2011-08-12 20:33:19
韓俊
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5樓2011-08-12 20:34:28
qingyuansw20
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6樓2011-08-13 09:41:52
晴天1882
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7樓2011-08-13 14:20:44
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 學習了！ 2011-08-13 15:46:36
韓俊(金幣+4): 謝謝你的詳細解答，受教了 2011-08-14 12:58:39
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 學習了！ 2011-08-13 15:46:36
韓俊(金幣+4): 謝謝你的詳細解答，受教了 2011-08-14 12:58:39
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蛋白質電泳影響因素非常多，我也提供一個想法，前提是你的各種藥品都沒有問題，尤其是APS和TEMED，這兩個是導致膠凝固快慢的決定因素。 因為看到你整塊膠都明顯有染色顏色了，我想，可能與你的膠不均勻有關系，也就是說你下面的凝固得很快，但是上面的沒有凝，導致膠不均勻。由此形成的孔徑大小就不均勻，所以有些條帶沒有分開。一般凝膠是20~30分鐘比較理想，我之前也搞得很暈，超過40分鐘往往膠就不均勻，跑出來的帶歪歪扭扭，有時也出現沒有條帶，凝膠時間太長不僅會影響均勻性，甚至連網孔都無法形成，丙烯酰胺→聚丙烯酰胺是形成網孔的過程。 如果你懷疑是液封的影響，你不妨做個試驗，即不液封，因為液封只是為了使分離膠與積層膠之間的界限憑證，以保證跑出來的條帶是直線的（各樣同時向前）。 |
8樓2011-08-13 14:49:04
9樓2011-08-13 14:50:51
韓俊
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10樓2011-08-14 13:38:45
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