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電泳 蛋白 DNA
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請教大家一個問題，蛋白（37KD）與一條標(biāo)記羧基的DNA單鏈（58nt）通過氨基羧基結(jié)合，想通過電泳檢測是否結(jié)合上了。 1、能不能用瓊脂糖電泳檢測呢？ 2、如果不行，為什么，有沒有相關(guān)的資料可以借鑒？ 先謝謝大家了！ |
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2樓2011-06-30 09:52:07
xiejb2005
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3樓2011-06-30 09:58:40
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4樓2011-06-30 10:01:58
xiejb2005
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【答案】應(yīng)助回帖
愛mm(金幣+4): 謝謝，您的回答很詳細。 2011-06-30 19:38:13
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Native-PAGE原理 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等變性劑的條件下，對保持活性的蛋白質(zhì)進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于同工酶的鑒定和提純。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷，它們的分離是依據(jù)其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用，因而可以得到較高的分辨率，尤其是在電泳分離后仍能保持蛋白質(zhì)和酶等生物大分子的生物活性，對于生物大分子的鑒定有重要意義，其方法是在凝膠上進行兩份相同樣品的電泳，電泳后將凝膠切成兩半，一半用于活性染色，對某個特定的生物大分子進行鑒定，另一半用于所有樣品的染色，以分析樣品中各種生物大分子的種類和含量。 Native-PAGE實驗方法 非變性聚丙烯酰胺凝膠和變性sds-page電泳在操作上基本上是相同的，只是非變性聚丙烯酰胺凝膠的配制和電泳緩沖液中不能含有變性劑如SDS等。 一般蛋白進行非變性凝膠電泳要先分清是堿性還是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候，要利用低pH凝膠系統(tǒng)，分離酸性蛋白時候，要利用高pH凝膠系統(tǒng)。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的pH是8.8的緩沖系統(tǒng)，蛋白會帶負(fù)電荷，蛋白會相陽極移動；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進行，蛋白帶正電荷，這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳2 @! `8 w* I, ] |
5樓2011-06-30 10:03:03
6樓2011-06-30 19:29:09
7樓2011-06-30 19:32:57
芯片妞妞
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8樓2012-07-05 21:55:33
9樓2012-07-06 15:05:46
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