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lmzxcom1金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
基因中存在發(fā)卡結(jié)構(gòu)
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本人在pET30a質(zhì)粒上插入了一個(gè)基因片段，整個(gè)轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA應(yīng)該是組氨酸標(biāo)簽--S-tag--基因序列，在基因的5'端出現(xiàn)了一個(gè)發(fā)卡結(jié)構(gòu)ATGCCTXXXXXXXXXXXXXXXAGG,據(jù)說(shuō)在N端存在發(fā)卡結(jié)構(gòu)可能導(dǎo)致翻譯困難，但是組氨酸標(biāo)簽一段在這個(gè)發(fā)卡結(jié)構(gòu)之前，這個(gè)時(shí)候還能形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)么，會(huì)對(duì)基因表達(dá)造成影響？我本人誘導(dǎo)表達(dá)之后，有明顯的酶活，但是蛋白點(diǎn)用完成看不出來(lái)。。。 [ Last edited by lmzxcom1 on 2011-6-24 at 10:15 ] |
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 【分子生物】EPI帖 |
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lxj341401
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
lmzxcom1(金幣+1): 謝謝 2011-06-24 10:36:11
西瓜(金幣+5, EPI+1): 專(zhuān)家就是專(zhuān)家 2011-06-24 10:43:22
lmzxcom1(金幣+1): 謝謝 2011-06-24 10:36:11
西瓜(金幣+5, EPI+1): 專(zhuān)家就是專(zhuān)家 2011-06-24 10:43:22
| 先誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)、宿主菌酶活對(duì)照下，有明顯酶活表達(dá)就沒(méi)問(wèn)題。其實(shí)前面5‘端還有His-tag的話，你這個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)也不在5’-端了，另外你這個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)才三對(duì)堿基配對(duì)，不明顯的，應(yīng)該影響不大�；钚缘偷脑�，可以考慮再去優(yōu)化表達(dá)條件。 |
2樓2011-06-24 10:19:28
lmzxcom1
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3樓2011-06-24 10:31:17
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4樓2011-06-24 10:55:31
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有關(guān)hairpin的問(wèn)題，我從新看了一下，在序列的中間，還存在一段，比較明顯的ATGCCCAGCAGCTGGGCGGTGCCCA,里面存在兩個(gè)hairpin，一個(gè)hairpin存在6個(gè)連續(xù)的序列，另一個(gè)hairpin有5個(gè)連續(xù)的序列。 稀有密碼子也查過(guò)了，有5.6%的含量，并且有兩個(gè)稀有密碼子連續(xù)的情況。 不過(guò)我根據(jù)有酶活，沒(méi)有明顯蛋白表達(dá)這個(gè)表象，決定用37度，1mMIPTG誘導(dǎo)，看看到底有沒(méi)有表達(dá)蛋白 |
5樓2011-06-24 12:22:59
jjj8658
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6樓2011-11-15 20:36:04
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