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lmzxcom1金蟲 (著名寫手)
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[求助]
基因中存在發(fā)卡結(jié)構(gòu)
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本人在pET30a質(zhì)粒上插入了一個(gè)基因片段，整個(gè)轉(zhuǎn)錄出來的mRNA應(yīng)該是組氨酸標(biāo)簽--S-tag--基因序列，在基因的5'端出現(xiàn)了一個(gè)發(fā)卡結(jié)構(gòu)ATGCCTXXXXXXXXXXXXXXXAGG,據(jù)說在N端存在發(fā)卡結(jié)構(gòu)可能導(dǎo)致翻譯困難，但是組氨酸標(biāo)簽一段在這個(gè)發(fā)卡結(jié)構(gòu)之前，這個(gè)時(shí)候還能形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)么，會(huì)對(duì)基因表達(dá)造成影響？我本人誘導(dǎo)表達(dá)之后，有明顯的酶活，但是蛋白點(diǎn)用完成看不出來。。。 [ Last edited by lmzxcom1 on 2011-6-24 at 10:15 ] |
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lmzxcom1
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3樓2011-06-24 10:31:17
lxj341401
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
lmzxcom1(金幣+1): 謝謝 2011-06-24 10:36:11
西瓜(金幣+5, EPI+1): 專家就是專家 2011-06-24 10:43:22
lmzxcom1(金幣+1): 謝謝 2011-06-24 10:36:11
西瓜(金幣+5, EPI+1): 專家就是專家 2011-06-24 10:43:22
| 先誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)、宿主菌酶活對(duì)照下，有明顯酶活表達(dá)就沒問題。其實(shí)前面5‘端還有His-tag的話，你這個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)也不在5’-端了，另外你這個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)才三對(duì)堿基配對(duì)，不明顯的，應(yīng)該影響不大。活性低的話，可以考慮再去優(yōu)化表達(dá)條件。 |
2樓2011-06-24 10:19:28
lxj341401
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4樓2011-06-24 10:55:31
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