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[交流]
聚乙二醇濃縮蛋白對蛋白的影響
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一直在用20000的聚乙二醇濃縮我的蛋白，方法是這樣的，我的蛋白通過硫酸銨沉淀后，袋里水很多，將聚乙二醇晶體灑在透析袋（排阻3500）上，直到析出水分達到要求為止。 今天逛論壇，看到有人說聚乙二醇雖然分子量大，但這種濃縮方法也可能使一部分進入到透析袋中，想問問，聚乙二醇與蛋白質接觸，會對蛋白質產(chǎn)生影響嗎？我這種濃縮直接撒晶體的方法，對我的蛋白會有變性等影響嗎？我的蛋白主要是堿性蛋白。謝了 |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
nayitian_nan(金幣+1): 謝謝，還好，我用的是水溶液，里外都是~ 2011-06-24 17:02:35
amisking(金幣+3): 鼓勵應助 2011-06-24 20:08:56
silicare(EPI+1): 2011-06-25 09:06:16
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
nayitian_nan(金幣+1): 謝謝，還好，我用的是水溶液，里外都是~ 2011-06-24 17:02:35
amisking(金幣+3): 鼓勵應助 2011-06-24 20:08:56
silicare(EPI+1): 2011-06-25 09:06:16
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一般來說這樣做不會有影響。樓主擔心的話，可以試試別的方法啊。例如： 1、蛋白濃縮管——快且保險的方法； 2、用電風扇對著透析袋吹，或者實驗室如果有抽干室或者干燥室，放進去，過一段時間去看看，水分就會少掉很多，雖然方法有點土，但是能用（我用過），但是這樣做要注意的是，要求一定要低溫保存的蛋白謹慎操作，畢竟電風扇不能放進冰箱，抽干室即使有空調溫度也不會很低。 還有就是注意水分去掉后，除了蛋白濃縮了外，緩沖液的離子濃度之類的也會改變，有需要的話記得要調回去。 |
2樓2011-06-24 15:40:04
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +248 - BioEPI: 73
- 應助: 257 (大學生)
- 貴賓: 0.272
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★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
silicare(金幣+3, EPI+1): 2011-06-25 09:06:23
nayitian_nan(金幣+2): 恩啊，就是的，是看了淀粉酶你給那個朋友的帖子，我考慮過超濾，但實驗室條件有限，我打算透析完直接冷凍干燥，以前是聚乙二醇濃縮后凍干的~ 2011-06-25 09:47:53
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
silicare(金幣+3, EPI+1): 2011-06-25 09:06:23
nayitian_nan(金幣+2): 恩啊，就是的，是看了淀粉酶你給那個朋友的帖子，我考慮過超濾，但實驗室條件有限，我打算透析完直接冷凍干燥，以前是聚乙二醇濃縮后凍干的~ 2011-06-25 09:47:53
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你說看到那樣說的那個人就是我，很聰明，懂得先搜集資料。但是PEG2萬確實是有可能透得過排阻3500的透析袋的，雖然標明3千五的透析袋質量再差，有超過2萬的孔徑也少，但透析袋的排阻標準是球狀蛋白質，PEG是線性的，理論上比3千5小的孔徑也能進去。 你用了硫酸銨沉淀，下一步如果接上疏水層析也可以濃縮樣品，我樣品有二百多毫升的層析之后活力組分合并大概有50毫升，算是濃縮了，也純化了好幾倍，不過會有30%損失。 你也可以超濾，用濾膜，可以買超濾管離心，也可以買超濾膜開氮氣加壓。 至于PEG2萬對你的蛋白質有沒有影響就很難說了，蛋白質各有不同，誰都說不定，要先自己試。 |
3樓2011-06-24 23:17:49
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11樓2011-12-09 20:34:09
12樓2012-09-27 16:37:25
簡單回復
yingying158813樓
2012-09-27 21:12
回復
祝福~
xuwei370814樓
2013-07-05 17:04
回復
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