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mahoumeimei金蟲 (小有名氣)
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[求助]
puf酶與普通Taq酶混用PCR問題
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之前用普通Taq酶做的PCR，目的條帶比較單一而且很亮，因為要做A/T克隆測序，擔(dān)心普通Taq酶會導(dǎo)致突變，所以將puf與Taq按1:2混合使用，結(jié)果P不出來。請問各位高手，我該作何調(diào)整？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-06-29 12:51:27
mahoumeimei(金幣+2): 我知道有那種plus的酶，不過實驗室剛好有puf和普通Taq，就直接混著用了 2011-07-01 11:04:23
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-06-29 12:51:27
mahoumeimei(金幣+2): 我知道有那種plus的酶，不過實驗室剛好有puf和普通Taq，就直接混著用了 2011-07-01 11:04:23
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為什么要兩者混合呢？ 直接買個Taq plus酶不就可以了，taq plus酶是將taq酶和pfu混合得到。。。。 這個酶保真性很高。。。 Taq Plus DNA Polymerase是Taq和pfu DNA Polymerase按照一定 比例混合的酶，具有5'→3'聚合酶活性、雙鏈DNA特異性的5'→3'外切酶 活性和3'→5'外切酶活性。其PCR產(chǎn)物為部分A末端，可直接連接到T/A 克隆載體；或者純化后加A末端再連接，以提高連接效率。 Taq Plus DNA Polymerase 擴(kuò)增效率高于單一的Taq DNA Polymerase或者pfu DNA Polymerase，簡單模板可以擴(kuò)增長達(dá)15kb，復(fù) 雜模板可達(dá)10 kb ； 保真性介于Taq DNA Polymerase 和pfu DNA Polymerase之間。 |
9樓2011-06-29 12:08:04
10樓2011-06-29 20:45:41
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