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mamjun金蟲 (小有名氣)
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圖例請(qǐng)教聚合酶（Taq酶)外切和內(nèi)切具體怎么起作用的，急！
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有一個(gè)莖環(huán)狀引物，其與模板結(jié)合的圖形我大致畫成這個(gè)樣子： （模板） 5’******************************************3‘ 3’ ******************======) 5‘======) （莖環(huán)引物） 說(shuō)明：引物一部分和模板退火結(jié)合，右邊的另一部分自己形成莖環(huán)結(jié)構(gòu) 我想問(wèn)得問(wèn)題是：如果PCR擴(kuò)增的時(shí)候，Taq酶會(huì)吧引物5‘端的莖環(huán)結(jié)構(gòu)給切掉嗎，普通的Taq沒(méi)有3’到5‘外切活性吧？ 那能切除莖環(huán)結(jié)構(gòu)的是3’到5‘外切活性，還是5’→3‘外切活性啊？所以說(shuō)事我搞不明白5’→3’和3‘→5’外切究竟是怎么回事，怎么具體起作用的，謝謝！！ 追問(wèn)：如果不想莖環(huán)結(jié)構(gòu)被某種外切活性給切除掉，需要在5‘端添加修飾基團(tuán)的話，添加什么修飾呢？ [ Last edited by mamjun on 2011-7-21 at 08:21 ] |
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2樓2011-07-21 10:51:17
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dhd997: 獎(jiǎng)勵(lì)了，呵呵，你也要申請(qǐng)專家？已經(jīng)反饋給區(qū)長(zhǎng)了 2011-07-21 15:25:56
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正解，獎(jiǎng)勵(lì)EPI  |
4樓2011-07-21 14:26:43
mamjun
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6樓2011-07-21 22:06:19
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7樓2011-07-23 18:58:47
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西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)下 2011-07-23 22:30:18
西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)下 2011-07-23 22:30:18
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我的理解是，即使是莖環(huán)部分可以自己形成雙鏈，但是，存在一個(gè)兩種狀態(tài)的比例（單鏈狀態(tài)和莖環(huán)狀態(tài)），單鏈狀態(tài)的會(huì)配對(duì)合成雙鏈沒(méi)有疑問(wèn)，但是殘余的引物還是有會(huì)從莖環(huán)狀態(tài)轉(zhuǎn)變過(guò)來(lái)成為單鏈，就像化學(xué)平衡一樣，另外你的PCR有那么多次循環(huán)，留給酶把相當(dāng)多的引物用掉的時(shí)間和機(jī)會(huì)很多。 如果，你是想獲得末端有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的DNA，你還是想其他的辦法 |
8樓2011-07-23 21:30:22
mamjun
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9樓2011-07-24 10:02:55
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10樓2011-07-24 20:18:02
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