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秦川蘿卜頭金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌脂肪酶活性的測(cè)定
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| 大家好：我想在這跟大家討論一下脂肪酶活性的測(cè)定方法。我是以聚乙烯醇橄欖油乳化液為底物，（2g聚乙烯醇，150ml水，加熱溶解，加入50ml橄欖油。用組織攪拌機(jī)，勻漿兩分鐘）粗酶液，用的就是細(xì)菌的菌懸液！測(cè)定過(guò)程：取5ml PH=7.5的磷酸緩沖液5ml，分別到4個(gè)錐形瓶中！在40℃預(yù)熱5min 加入2ml菌懸液，40℃保溫15分鐘，取出后，加入15ml95%乙醇做終止劑。其中兩個(gè)空白以失活的酶加入！其他條件都一樣！為什么我用0.05mol/L的OHNa滴定，發(fā)現(xiàn)消耗的堿量很少，且跟空白差不多！我不知道問(wèn)題在哪？我的方法哪有不對(duì)嗎？請(qǐng)各位指教。謝謝！ |
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jinpeng_6118
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2樓2012-01-08 22:10:38
秦川蘿卜頭
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3樓2012-01-08 22:17:52
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857(金幣+1): 大力鼓勵(lì)交流^_^ 2012-01-12 11:07:28
秦川蘿卜頭(金幣+5): 2012-01-12 14:22:40
zhang8826857(金幣+1): 大力鼓勵(lì)交流^_^ 2012-01-12 11:07:28
秦川蘿卜頭(金幣+5): 2012-01-12 14:22:40
細(xì)胞破碎采用的是超聲波破碎儀，要是沒(méi)有細(xì)胞破碎儀的話，你可以采用反復(fù)凍融法破碎，后者的效果不是很好。或者采用溶菌酶也行。我們采用pNP系列底物測(cè)定酶活，采用紫外分光光度計(jì)動(dòng)力學(xué)曲線連續(xù)掃描來(lái)測(cè)定酶促反應(yīng)斜率。pNP底物采用乙腈溶解，配成10mM濃度就行，然后直接加到反應(yīng)體系中就可以了。 |
4樓2012-01-09 15:54:52
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您好，因?yàn)槲沂菍W(xué)化學(xué)的，現(xiàn)在做的東西需要測(cè)一下酶活，您能不能給我一個(gè)具體的P-NP方法，小弟萬(wàn)分感激！我的郵箱：shenyinghui.520@163.com 謝謝！ |
5樓2012-01-11 00:26:34
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6樓2012-10-26 13:37:09
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