 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5301 | 回復(fù): 14 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
camen新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
請(qǐng)教脂肪酶活性測(cè)定
|
||
|
大家好，問(wèn)個(gè)酶學(xué)的基本問(wèn)題。 我利用分光光度計(jì)法pNPB測(cè)脂肪酶活性，測(cè)405nm處連續(xù)光吸收，根據(jù)初速度得到斜率，請(qǐng)問(wèn)如何根據(jù)斜率來(lái)計(jì)算酶活結(jié)果，非常感謝！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 生工檢測(cè)理論與實(shí)務(wù) |
» 猜你喜歡
290求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
327求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600 286分 材料求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
085601材料工程找調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
南京大學(xué)化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- p-NPP法測(cè)定脂肪酶活性p-NP標(biāo)準(zhǔn)曲線問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 霉菌脂肪酶活性的測(cè)定
已經(jīng)有9人回復(fù)
- P-Npp法測(cè)脂肪酶活性
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 細(xì)菌脂肪酶活性的測(cè)定
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 發(fā)酵液中脂肪酶的活力用什么方法測(cè)定
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 脂肪酶活力測(cè)定
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】滴定法測(cè)脂肪酶活性
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】脂肪酶活性檢測(cè)
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教脂肪酶活力測(cè)定
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助】脂肪酶活力測(cè)定
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】醛基修飾的氨基載體 （戊二醛交聯(lián)） 固定化脂肪酶 沒(méi)有活性（失活）
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】哪位高手給指點(diǎn)下脂肪酶活性測(cè)定
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】有人做過(guò)脂肪酶或脂肪氧化酶活力測(cè)定的么？
已經(jīng)有12人回復(fù)
jinpeng_6118
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1019189
- 注冊(cè): 2010-05-15
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
利用分光光度計(jì)法pNPB測(cè)脂肪酶活性，酶比活計(jì)算公式如下： Beer定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式為A=kbc， 摩爾吸光系數(shù)：公式A=kbc中的以為1mol/L,b為1cm時(shí)，則系數(shù)k稱(chēng)為摩爾吸光系數(shù)，以ε表示，單位為升/（摩爾•厘米）[L/(mol•cm）]，A=kbc可寫(xiě)成A=εc。 A:吸光值 c：pNP濃度 mol/L ε：摩爾吸光系數(shù) t：時(shí)間 min V：反應(yīng)體系體積 L △ M：pNP生成總量 單位mol 我們的b=1cm 因而公式：A=cε 所以我們測(cè)得的動(dòng)力學(xué)曲線斜率△A/t=ε△c/t=ε△M/tV △M/t=△A V /tε �！鱉/t：每分鐘PNP的生成（mol/min），等同于每分鐘pNPB的分解量 1個(gè)酶活力單位定義為1分鐘水解底物生成1μmol對(duì)硝基苯酚(胺)所需要的酶量 所以酶比活計(jì)算公式：U/mg=10（6次方）x△A V /tεM=10（6次方）x K V/εM K為斜率，M為酶的加入量（單位mg），V為測(cè)定時(shí)的體積（L），ε：摩爾吸光系數(shù)0.016×106 L/(mol•cm) |
9樓2012-01-08 22:27:34
camen
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 15
- 帖子: 4
- 在線: 1.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1376721
- 注冊(cè): 2011-08-22
2樓2011-08-22 22:59:53
3樓2011-08-23 08:32:13
imfly77
木蟲(chóng) (小有名氣)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 3065.8
- 散金: 234
- 紅花: 2
- 帖子: 287
- 在線: 151.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1324638
- 注冊(cè): 2011-06-16
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化工與食品化工
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)交流，歡迎常來(lái) 2011-08-23 13:27:36
lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)交流，歡迎常來(lái) 2011-08-23 13:27:36
|
1分子的pNPB水解生成1分子的pNP（對(duì)硝基苯酚），pNP在405 nm下有特異性吸收，對(duì)應(yīng)有個(gè)摩爾消光系數(shù)ε（比如18.8 cm2/μmol，不同的文獻(xiàn)值會(huì)有略微差別，也可以你自己用pNP標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。一般來(lái)說(shuō)選一個(gè)值，然后注明參考文獻(xiàn)就行了），按下面這個(gè)式子計(jì)算酶活：U=（斜率×稀釋倍數(shù)）/（光程×摩爾消光系數(shù)） 其中： 斜率就是酶標(biāo)儀讀書(shū)，注意通常酶標(biāo)儀讀數(shù)單位是10^-3 min-1； 光程就是溶液最低處的厚度，需要量一下； 稀釋倍數(shù)是指體系體積與酶的加入量的比，比如200 ul體系+5 ul酶，稀釋倍數(shù)就是41. 最后注意檢查一下所有物理量的量綱要統(tǒng)一。 |
4樓2011-08-23 08:39:09
muchong5577
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 929.2
- 散金: 67
- 紅花: 3
- 帖子: 675
- 在線: 136.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 703384
- 注冊(cè): 2009-02-18
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
5樓2011-08-23 08:49:16
cexoihtydx
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 12
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.3
- 散金: 906
- 紅花: 5
- 帖子: 766
- 在線: 263.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 722752
- 注冊(cè): 2009-03-14
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 人類(lèi)遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
看天(金幣+5, BioEPI+1): 鼓勵(lì)熱心回答 2011-08-26 12:53:19
看天(金幣+5, BioEPI+1): 鼓勵(lì)熱心回答 2011-08-26 12:53:19
|
脂肪酶活性測(cè)定 1 pNP-乙腈-丙酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建： 原液：將pNP溶解與PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中。 稀釋液：及與配置原液時(shí)相同體積的PBS，乙腈，丙酮溶液。 10ml測(cè)試體系：原液投入量+稀釋液投入量 = 10ml 空白對(duì)照：稀釋液10ml 8組測(cè)試組：原液不同投入梯度+ 相應(yīng)稀釋液 = 10ml. 測(cè)OD405,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y = A x + B,和斜率 2 脂肪酶的酶活測(cè)定: Lipase 的游離酶的酶活測(cè)定: 第一步:稱(chēng)取 Lipase 干粉(精酶),用10ml PH6.5 0.01m的PBS溶解保存. 第二步:移取上面配制的酶液50ul于搖瓶中,再加入PH 6.5 0.01m的PBS 2.8ml,在搖床中37度,150rpm 條件下震蕩幾分鐘后加入10mM 的對(duì)硝基苯酚乙酯150ul,加入后立即計(jì)時(shí)三分鐘反應(yīng).。 第三步:三分鐘反應(yīng)結(jié)束后立即加入丙酮3ml終止反應(yīng),繼續(xù)震蕩幾分鐘后過(guò)濾,取濾液靜態(tài)測(cè)OD405 值. 空白配制：PH 6.5 0.01m的PBS 2.85ml+對(duì)硝基苯酚乙酯+丙酮 3 比活力計(jì)算 將測(cè)得的0D405，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，根據(jù)活力測(cè)定反應(yīng)體積，脂肪酶蛋白濃度和反應(yīng)時(shí)間，得到比活力：X um/min/mg |
6樓2011-08-26 12:44:57
swqowen
金蟲(chóng) (職業(yè)作家)
勛章歸天
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 金幣: 1384.2
- 散金: 6197
- 紅花: 12
- 帖子: 4785
- 在線: 805.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1263169
- 注冊(cè): 2011-04-12
- 專(zhuān)業(yè): 市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)
7樓2011-08-26 19:49:13
swqowen
金蟲(chóng) (職業(yè)作家)
勛章歸天
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 金幣: 1384.2
- 散金: 6197
- 紅花: 12
- 帖子: 4785
- 在線: 805.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1263169
- 注冊(cè): 2011-04-12
- 專(zhuān)業(yè): 市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)
8樓2011-08-26 19:49:48
|
您好！ 我是做這方面實(shí)驗(yàn)的研究生，現(xiàn)在準(zhǔn)備些畢業(yè)論文，也遇到了這樣的問(wèn)題。根據(jù)您的回答，我理解了這幾個(gè)公式，現(xiàn)在有個(gè)問(wèn)題是這樣的，我做的反應(yīng)體系是100微升，是用酶標(biāo)儀測(cè)的OD405nm。因?yàn)楦鶕?jù)您最后的公式：U/mg=10（6次方）x△A V /tεM=10（6次方）x K V/εM，測(cè)得的脂肪酶活力只與A，V，t，和ε有關(guān)，與我底物的C物質(zhì)的量濃度沒(méi)有關(guān)系了。 我的問(wèn)題是，我的底物濃度是0.5mmol/L不是1mol/L，反應(yīng)用的不是比色皿，b不是1cm，那我如何用摩爾消光系數(shù) 計(jì)算酶活力呢？謝謝！ |
10樓2014-06-24 21:41:45
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 camen 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
