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[求助]
請(qǐng)教脂肪酶活性測(cè)定
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大家好，問(wèn)個(gè)酶學(xué)的基本問(wèn)題。 我利用分光光度計(jì)法pNPB測(cè)脂肪酶活性，測(cè)405nm處連續(xù)光吸收，根據(jù)初速度得到斜率，請(qǐng)問(wèn)如何根據(jù)斜率來(lái)計(jì)算酶活結(jié)果，非常感謝！ |
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 生工檢測(cè)理論與實(shí)務(wù) |
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imfly77
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【答案】應(yīng)助回帖
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lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)交流，歡迎常來(lái) 2011-08-23 13:27:36
lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)交流，歡迎常來(lái) 2011-08-23 13:27:36
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1分子的pNPB水解生成1分子的pNP（對(duì)硝基苯酚），pNP在405 nm下有特異性吸收，對(duì)應(yīng)有個(gè)摩爾消光系數(shù)ε（比如18.8 cm2/μmol，不同的文獻(xiàn)值會(huì)有略微差別，也可以你自己用pNP標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定。一般來(lái)說(shuō)選一個(gè)值，然后注明參考文獻(xiàn)就行了），按下面這個(gè)式子計(jì)算酶活：U=（斜率×稀釋倍數(shù)）/（光程×摩爾消光系數(shù)） 其中： 斜率就是酶標(biāo)儀讀書，注意通常酶標(biāo)儀讀數(shù)單位是10^-3 min-1； 光程就是溶液最低處的厚度，需要量一下； 稀釋倍數(shù)是指體系體積與酶的加入量的比，比如200 ul體系+5 ul酶，稀釋倍數(shù)就是41. 最后注意檢查一下所有物理量的量綱要統(tǒng)一。 |
4樓2011-08-23 08:39:09
2樓2011-08-22 22:59:53
3樓2011-08-23 08:32:13
muchong5577
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5樓2011-08-23 08:49:16
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