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[求助]
請教脂肪酶活性測定
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大家好，問個酶學的基本問題。 我利用分光光度計法pNPB測脂肪酶活性，測405nm處連續(xù)光吸收，根據(jù)初速度得到斜率，請問如何根據(jù)斜率來計算酶活結(jié)果，非常感謝！ |
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3樓2011-08-23 08:32:13
2樓2011-08-22 22:59:53
imfly77
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【答案】應(yīng)助回帖
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lstt09nk(金幣+3): 鼓勵交流，歡迎常來 2011-08-23 13:27:36
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1分子的pNPB水解生成1分子的pNP（對硝基苯酚），pNP在405 nm下有特異性吸收，對應(yīng)有個摩爾消光系數(shù)ε（比如18.8 cm2/μmol，不同的文獻值會有略微差別，也可以你自己用pNP標準品標定。一般來說選一個值，然后注明參考文獻就行了），按下面這個式子計算酶活：U=（斜率×稀釋倍數(shù)）/（光程×摩爾消光系數(shù)） 其中： 斜率就是酶標儀讀書，注意通常酶標儀讀數(shù)單位是10^-3 min-1； 光程就是溶液最低處的厚度，需要量一下； 稀釋倍數(shù)是指體系體積與酶的加入量的比，比如200 ul體系+5 ul酶，稀釋倍數(shù)就是41. 最后注意檢查一下所有物理量的量綱要統(tǒng)一。 |
4樓2011-08-23 08:39:09
muchong5577
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5樓2011-08-23 08:49:16
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