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秦川蘿卜頭金蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌脂肪酶活性的測定
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| 大家好：我想在這跟大家討論一下脂肪酶活性的測定方法。我是以聚乙烯醇橄欖油乳化液為底物，（2g聚乙烯醇，150ml水，加熱溶解，加入50ml橄欖油。用組織攪拌機(jī)，勻漿兩分鐘）粗酶液，用的就是細(xì)菌的菌懸液！測定過程：取5ml PH=7.5的磷酸緩沖液5ml，分別到4個(gè)錐形瓶中！在40℃預(yù)熱5min 加入2ml菌懸液，40℃保溫15分鐘，取出后，加入15ml95%乙醇做終止劑。其中兩個(gè)空白以失活的酶加入！其他條件都一樣！為什么我用0.05mol/L的OHNa滴定，發(fā)現(xiàn)消耗的堿量很少，且跟空白差不多！我不知道問題在哪？我的方法哪有不對嗎？請各位指教。謝謝！ |
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9樓2013-11-06 00:17:48
jinpeng_6118
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2樓2012-01-08 22:10:38
秦川蘿卜頭
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3樓2012-01-08 22:17:52
jinpeng_6118
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857(金幣+1): 大力鼓勵(lì)交流^_^ 2012-01-12 11:07:28
秦川蘿卜頭(金幣+5): 2012-01-12 14:22:40
zhang8826857(金幣+1): 大力鼓勵(lì)交流^_^ 2012-01-12 11:07:28
秦川蘿卜頭(金幣+5): 2012-01-12 14:22:40
細(xì)胞破碎采用的是超聲波破碎儀，要是沒有細(xì)胞破碎儀的話，你可以采用反復(fù)凍融法破碎，后者的效果不是很好�；蛘卟捎萌芫敢残�。我們采用pNP系列底物測定酶活，采用紫外分光光度計(jì)動(dòng)力學(xué)曲線連續(xù)掃描來測定酶促反應(yīng)斜率。pNP底物采用乙腈溶解，配成10mM濃度就行，然后直接加到反應(yīng)體系中就可以了。 |
4樓2012-01-09 15:54:52
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