 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 測酶活前處理心得
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2483 | 回復: 7 | ||||
[交流]
測酶活前處理心得 已有6人參與
|
|
一般一瓶動物細胞長滿后用胰酶消化，消化完以后用D-Hinks吹打下來，4℃，1000轉(zhuǎn)，6~10min 離心。倒掉上清，再用D-Hinks重新分散，4℃，1000轉(zhuǎn)，6~10min 離心，倒掉上清（如果暫時不要測酶活的話，直接將離心后的沉淀凍于-80℃，可保存2~3個月，用時直接加生理鹽水進行后處理即可）。再用生理鹽水重新分散，槍頭打勻，超聲波破碎，一般一瓶動物細胞加1mL生理鹽水，一般用總工作時間300S,，開5S，停10S，槽溫度稍設高點，一般50℃（此溫度與你EP管內(nèi)的溫度無關(guān)，但是溫度探針伸到反應體系中的溫度就得設低些），20%功率。破碎完后4℃，12000轉(zhuǎn)，5min 離心（看底部的沉淀多少，破碎完全的沉淀應該是很少的，如果還很多，重新打散后加時間再破碎）。將上清取出搖勻后檢測蛋白濃度，我用的是考馬斯亮藍+BSA法。然后蛋白用于即時檢測，暫時不用的話立刻凍在-80℃，可保存2~3天，但破碎后的蛋白最好當天檢測，不然活性會受到影響。 [ Last edited by silicare on 2014-5-14 at 18:30 ] |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 酶類相關(guān) |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
lixingliang» 猜你喜歡
0703化學調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
0854，計算機類招收調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
【0703化學調(diào)劑】-一志愿華中師范大學-六級475
已經(jīng)有6人回復
-
0854可跨調(diào)劑，一作一項核心論文五項專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287
已經(jīng)有4人回復
-
能源材料化學課題組招收碩士研究生8-10名
已經(jīng)有8人回復
-
0817 化學工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章
已經(jīng)有3人回復
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有11人回復
-
299求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
收復試調(diào)劑生
已經(jīng)有3人回復
-
280求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 酶活測定中的緩沖液
已經(jīng)有4人回復
- 怎樣測定固定化酶的酶活？
已經(jīng)有11人回復
- 脫羧酶酶活測定
已經(jīng)有3人回復
- 測定酶活，同一個樣品同樣的標準，我測得就比別人偏低，不知道為什么？
已經(jīng)有6人回復
- 測酶活性時總蛋白的測定
已經(jīng)有12人回復
- 幾丁質(zhì)酶測酶活的方法
已經(jīng)有29人回復
- 酶活測定時，為什么不加酶液的對照吸光度變化很快，而加了酶液的樣品反而非常穩(wěn)定？
已經(jīng)有10人回復
- 濾紙酶活測定時酶液稀釋倍數(shù)如何確定
已經(jīng)有4人回復
- 如何用DNS法測α-淀粉酶酶活
已經(jīng)有22人回復
- 分光光度計測定酶活中的問題
已經(jīng)有9人回復
- 已取得基因反向測序結(jié)果，要先如何處理再上blast比對？
已經(jīng)有4人回復
- 測CAT酶活，急求指導~~~大家?guī)蛶兔Π�，感激不盡~~~~
已經(jīng)有13人回復
- 純酶不透析直接測酶活有影響嗎
已經(jīng)有12人回復
- 圖例請教聚合酶（Taq酶)外切和內(nèi)切具體怎么起作用的，急！
已經(jīng)有11人回復
- DNS法測酶活性
已經(jīng)有4人回復
- 測定米曲霉酶活為負值
已經(jīng)有16人回復
- 用分光計怎么樣測酶活?
已經(jīng)有6人回復
- 【求助/交流】測定酶活的時候，多長時間記一次吸光度？需要記幾分鐘？ 怎么計算酶活?/a>
已經(jīng)有3人回復
- 【求助/交流】pNPG測酶活
已經(jīng)有17人回復
- 【求助/交流】粗酶液酶活測定
已經(jīng)有28人回復
- 以NADH為底物的酶的酶活測定
已經(jīng)有10人回復
lixingliang
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 12 (小學生)
- 金幣: 383.5
- 散金: 100
- 帖子: 181
- 在線: 41.6小時
- 蟲號: 1254305
- 注冊: 2011-04-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
2樓2012-01-08 08:04:11
 |
3樓2012-01-13 10:34:48
bjfwjp
銀蟲 (著名寫手)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1594.3
- 散金: 82
- 紅花: 1
- 帖子: 1725
- 在線: 123小時
- 蟲號: 681976
- 注冊: 2008-12-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境工程
4樓2012-01-16 13:52:39
 |
5樓2012-07-20 23:37:52
lyyimi
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 101.6
- 帖子: 105
- 在線: 23.4小時
- 蟲號: 1039438
- 注冊: 2010-06-10
- 專業(yè): 水產(chǎn)生物遺傳育種學
6樓2013-06-21 17:54:51
cuiwenchao
鐵桿木蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5183.4
- 紅花: 1
- 帖子: 74
- 在線: 110小時
- 蟲號: 1923629
- 注冊: 2012-08-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學
7樓2014-05-13 21:34:37
8樓2014-05-14 15:28:15
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 fanger 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 環(huán)境領(lǐng)域全國重點實驗室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +6 | 困于星晨 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +9 | z1z2z3879 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +4 | 太陽花天天開心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] [導師推薦]西南科技大學國防/材料導師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +6 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 求調(diào)劑 +13 | enenenhui 2026-03-13 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 復試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機化學 +5 | ZY-05 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +9 | 小羊小羊_ 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703化學求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ADT 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑，材料、化工皆可 +8 | 蘇打水7777 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 152697 2026-03-12 | 4/200 |
|