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yunhaoxu001金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
用分光計(jì)怎么樣測(cè)酶活? 已有5人參與
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 我在試驗(yàn)中測(cè)脂肪酶的活性，開(kāi)始用滴定法測(cè)定，但出現(xiàn)酶活為負(fù)的結(jié)果，所以尋求用分光計(jì)發(fā)測(cè)沒(méi)貨的方法或者其他的方法能夠準(zhǔn)確的測(cè)定酶活。 |
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2樓2011-05-17 15:18:16
newtime007
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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wolfebst(金幣+5, EPI+1): 鼓勵(lì)一下 2011-05-17 15:56:31
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所謂的分光計(jì)發(fā)測(cè)酶活是一種間接方法，首先尋找到具有紫外可見(jiàn)光吸收的底物，然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線法換算酶活（如酪蛋白酶）。所以你需要找到能有紫外可見(jiàn)光吸收之底物，估計(jì)脂肪類沒(méi)有，因此你還是滴定檢測(cè)吧。另外可試試下邊的 原理：用酸價(jià)作指標(biāo)， 用95%乙醇作終止劑， 通過(guò)酸價(jià)的測(cè)定反映脂肪酶分解脂肪的程度， 從而求得酶活力。 方法： 1、粗酶液的制備 用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸餾水溶解并定容至100 mL， 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。 2、酸價(jià)的測(cè)定 酸價(jià)是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數(shù)， 它用于衡量油脂的水解程度。實(shí)驗(yàn)中用酸堿滴定法測(cè)定水解液的酸價(jià)， 參照文獻(xiàn)[ 3， 4 ]中所使用的方法， 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液， 搖勻， 終止反應(yīng)， 并加入2滴酚酞指示劑， 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色， 在30 s內(nèi)不消失為終點(diǎn)， 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(shù)(V ) 。用同樣的方法測(cè)定空白值， 每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)兩次， 以平均值作為測(cè)定結(jié)果。 酸價(jià)按下式計(jì)算： X = C (V - V0 ) ×40 /M 式中: X —油脂酸價(jià)(mgNaOH /g油) C—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L) M —試樣的質(zhì)量( g) 40—NaOH的mmol質(zhì)量(mg/mmol) 3粗脂肪酶活力的測(cè)定 在最佳水解條件下， 分別測(cè)得粗脂肪酶和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶水解液的酸價(jià)X1、X2 ， 根據(jù)公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力， 其中U1為粗脂肪酶活力， U為標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶活力。 |
3樓2011-05-17 15:37:41
冼亮淀粉酶
專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
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滴定法是分析化學(xué)范疇，可以做到分析純的鑒定。分光光度法要產(chǎn)生可見(jiàn)光的差別才能看得出來(lái)，靈敏度比滴定法差得多。既然測(cè)定酶活力的時(shí)候出現(xiàn)負(fù)值，就表示酶活力太低根本測(cè)定不出來(lái)，這樣的情況我的實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)過(guò)多次了，即使用分光光度計(jì)也是徒勞，我用進(jìn)口的酶標(biāo)儀也是測(cè)定不出來(lái)的，樓主別想著用更加落后的分光光度計(jì)了。 別想著什么操作步驟，趁早設(shè)計(jì)課題，會(huì)節(jié)省更多時(shí)間。 |
4樓2011-05-17 16:16:58
冼亮淀粉酶
專家顧問(wèn) (知名作家)
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