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yunhaoxu001金蟲 (小有名氣)
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[交流]
用分光計怎么樣測酶活? 已有5人參與
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我在試驗中測脂肪酶的活性,開始用滴定法測定,但出現(xiàn)酶活為負的結(jié)果,所以尋求用分光計發(fā)測沒貨的方法或者其他的方法能夠準(zhǔn)確的測定酶活。 |
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金蟲 (小有名氣)
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所謂的分光計發(fā)測酶活是一種間接方法,首先尋找到具有紫外可見光吸收的底物,然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線法換算酶活(如酪蛋白酶)。所以你需要找到能有紫外可見光吸收之底物,估計脂肪類沒有,因此你還是滴定檢測吧。另外可試試下邊的 原理:用酸價作指標(biāo), 用95%乙醇作終止劑, 通過酸價的測定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 從而求得酶活力。 方法: 1、粗酶液的制備 用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸餾水溶解并定容至100 mL, 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。 2、酸價的測定 酸價是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數(shù), 它用于衡量油脂的水解程度。實驗中用酸堿滴定法測定水解液的酸價, 參照文獻[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 搖勻, 終止反應(yīng), 并加入2滴酚酞指示劑, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色, 在30 s內(nèi)不消失為終點, 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(shù)(V ) 。用同樣的方法測定空白值, 每個試驗重復(fù)兩次, 以平均值作為測定結(jié)果。 酸價按下式計算: X = C (V - V0 ) ×40 /M 式中: X —油脂酸價(mgNaOH /g油) C—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L) M —試樣的質(zhì)量( g) 40—NaOH的mmol質(zhì)量(mg/mmol) 3粗脂肪酶活力的測定 在最佳水解條件下, 分別測得粗脂肪酶和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶水解液的酸價X1、X2 , 根據(jù)公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1為粗脂肪酶活力, U為標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶活力。 |

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