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mamjun金蟲 (小有名氣)
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圖例請教聚合酶（Taq酶)外切和內(nèi)切具體怎么起作用的，急！
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有一個莖環(huán)狀引物，其與模板結(jié)合的圖形我大致畫成這個樣子： （模板） 5’******************************************3‘ 3’ ******************======) 5‘======) （莖環(huán)引物） 說明：引物一部分和模板退火結(jié)合，右邊的另一部分自己形成莖環(huán)結(jié)構(gòu) 我想問得問題是：如果PCR擴(kuò)增的時候，Taq酶會吧引物5‘端的莖環(huán)結(jié)構(gòu)給切掉嗎，普通的Taq沒有3’到5‘外切活性吧？ 那能切除莖環(huán)結(jié)構(gòu)的是3’到5‘外切活性，還是5’→3‘外切活性��？所以說事我搞不明白5’→3’和3‘→5’外切究竟是怎么回事，怎么具體起作用的，謝謝��！ 追問：如果不想莖環(huán)結(jié)構(gòu)被某種外切活性給切除掉，需要在5‘端添加修飾基團(tuán)的話，添加什么修飾呢？ [ Last edited by mamjun on 2011-7-21 at 08:21 ] |
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anlewo7777
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西瓜(金幣+3): 鼓勵下 2011-07-23 22:30:18
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我的理解是，即使是莖環(huán)部分可以自己形成雙鏈，但是，存在一個兩種狀態(tài)的比例（單鏈狀態(tài)和莖環(huán)狀態(tài)），單鏈狀態(tài)的會配對合成雙鏈沒有疑問，但是殘余的引物還是有會從莖環(huán)狀態(tài)轉(zhuǎn)變過來成為單鏈，就像化學(xué)平衡一樣，另外你的PCR有那么多次循環(huán)，留給酶把相當(dāng)多的引物用掉的時間和機(jī)會很多。 如果，你是想獲得末端有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的DNA，你還是想其他的辦法 |
8樓2011-07-23 21:30:22
anlewo7777
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4樓2011-07-21 14:26:43
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