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380218013金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
WB 有內(nèi)參 么有目得。why ?
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小弟最近做WB遇到麻煩，請(qǐng)大蝦解答！ 30ug上樣，染色膜上有蛋白，顯影有內(nèi)參且較好，但是沒(méi)有目的，加發(fā)光液也不亮的。目的的二抗和內(nèi)參的二抗是一樣的，這樣是不是只能是一抗的問(wèn)題？（是不是一抗稀釋后放冰箱時(shí)間長(zhǎng)的原因？） 另外，這樣的膜之后是否可以重新封閉，加一抗和二抗？ 3Q |
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2樓2011-06-29 20:58:06
380218013
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3樓2011-06-29 21:18:05
terry130
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dhd997(金幣+5): good 2011-06-30 18:43:27
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這種情況很常見(jiàn)，要知道你的內(nèi)參都是豐度很高的蛋白，而你的目的蛋白往往是一些低豐度蛋白。就算一抗好用，有的時(shí)候如果豐度太低的話條帶都是很淡的。30ug上樣量還可以，你可以先嘗試一次長(zhǎng)曝光，比如1h曝光，如果還是沒(méi)有目的條帶的話就加大上樣量再試試，當(dāng)你嘗試100ug+1h expose還沒(méi)有條帶之后，再考慮換抗體吧。 另外目的蛋白豐度低的時(shí)候做WB的時(shí)候最好把內(nèi)參和目的蛋白剪開(kāi)分別做，否則內(nèi)參的信號(hào)太強(qiáng)容易干擾你的目的蛋白的曝光反應(yīng)。 |
4樓2011-06-30 07:48:59
380218013
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5樓2011-07-01 22:31:44
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