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a83875785鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
【求助】WB中，核蛋白內(nèi)參和總蛋白內(nèi)參的問(wèn)題 已有11人參與
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| 被告知核蛋白內(nèi)參Histone和總蛋白內(nèi)參貝塔-actin分別是用于核蛋白的蛋白衡量和總蛋白的蛋白衡量，但是我不知道為什么要這樣，那么如果用Histone用于總蛋白的蛋白定量會(huì)怎么樣？或者actin用于核蛋白的衡量會(huì)怎么樣？謝謝了 |
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:56:22
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Histone用于總蛋白的蛋白定量會(huì)怎么樣？ 或者actin用于核蛋白的衡量會(huì)怎么樣？ 我不知道你為什么這么想問(wèn)題。也不知道你為什么有這種疑問(wèn)？ 組蛋白是和DNA等核酸組合在一起形成核蛋白，換句話(huà)，核蛋白組成成分是組蛋白，也非常保守，不會(huì)因?yàn)槭艿教幚矶鴾p少。所以用于作為內(nèi)參。 B-actin，至于為什么作為總蛋白的內(nèi)參，我不想過(guò)多解釋。 但是如你所說(shuō)，如果反過(guò)來(lái)，肯定不行。 |
3樓2011-04-14 11:50:19
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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有些人提取蛋白會(huì)選擇胞漿、胞核分開(kāi)提取，不提取總蛋白，所以做內(nèi)參要選擇相應(yīng)部位表達(dá)穩(wěn)定的蛋白。beta-actin在胞漿中表達(dá)高效穩(wěn)定，而總蛋白主要成分就是胞漿蛋白，所以beta-actin可以作為總蛋白的內(nèi)參。理論上細(xì)胞核內(nèi)不表達(dá)beta-actin，所以不能用于核蛋白內(nèi)參。同理，細(xì)胞核內(nèi)的蛋白用于做總蛋白的內(nèi)參，自然也不合理，內(nèi)參自當(dāng)選擇與目的蛋白表達(dá)部位相同的蛋白才有說(shuō)服力。 實(shí)際情況中，無(wú)論什么試劑盒，都不可能完全將胞漿、胞核蛋白完全分離開(kāi)，提取時(shí)總會(huì)有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定會(huì)有beta-actin，而胞漿蛋白也會(huì)有核蛋白的存在，所以你用兩種蛋白做內(nèi)參都能有結(jié)果，只是有的科學(xué)合理，有的不科學(xué)，沒(méi)有說(shuō)服力。 |
4樓2011-04-14 16:30:01
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b-actin是胞漿表達(dá)，Histone是胞核表達(dá)。細(xì)胞蛋白主要是在胞漿，所以b-actin的量要比Histone大的多。 用b-actin還是Histone做內(nèi)參，主要看你提取的是總蛋白還是核蛋白。如果提的是總蛋白，必須用b-actin，提的是胞核蛋白，必須用Histone，如果你提取的是總蛋白，但用了Histone，結(jié)果可能是做不出來(lái)或者條帶很弱（Histone相對(duì)于總蛋白來(lái)說(shuō)太少）。而如果提取的是核蛋白，用b-actin做內(nèi)參，結(jié)果則可能是做不出來(lái)（核內(nèi)沒(méi)有表達(dá)），或者內(nèi)參條帶不均勻（混入少量胞漿蛋白） 一般來(lái)說(shuō)，如果你的目的蛋白在胞漿表達(dá)，那當(dāng)然毋庸置疑，提取總蛋白，用b-actin，但如果在核表達(dá)，可以提總蛋白，也可以提核蛋白。但有些核蛋白的表達(dá)量比較低，提總蛋白可能就太稀了，所以要專(zhuān)門(mén)提取核蛋白。 |
9樓2013-01-16 13:30:15
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各位看應(yīng)該選擇誰(shuí)做內(nèi)參呢？ 10樓2014-11-29 23:09:33
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