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a83875785鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助】WB中，核蛋白內(nèi)參和總蛋白內(nèi)參的問題 已有11人參與
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| 被告知核蛋白內(nèi)參Histone和總蛋白內(nèi)參貝塔-actin分別是用于核蛋白的蛋白衡量和總蛋白的蛋白衡量，但是我不知道為什么要這樣，那么如果用Histone用于總蛋白的蛋白定量會怎么樣？或者actin用于核蛋白的衡量會怎么樣？謝謝了 |
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mkcc
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b-actin是胞漿表達，Histone是胞核表達。細胞蛋白主要是在胞漿，所以b-actin的量要比Histone大的多。 用b-actin還是Histone做內(nèi)參，主要看你提取的是總蛋白還是核蛋白。如果提的是總蛋白，必須用b-actin，提的是胞核蛋白，必須用Histone，如果你提取的是總蛋白，但用了Histone，結(jié)果可能是做不出來或者條帶很弱（Histone相對于總蛋白來說太少）。而如果提取的是核蛋白，用b-actin做內(nèi)參，結(jié)果則可能是做不出來（核內(nèi)沒有表達），或者內(nèi)參條帶不均勻（混入少量胞漿蛋白） 一般來說，如果你的目的蛋白在胞漿表達，那當(dāng)然毋庸置疑，提取總蛋白，用b-actin，但如果在核表達，可以提總蛋白，也可以提核蛋白。但有些核蛋白的表達量比較低，提總蛋白可能就太稀了，所以要專門提取核蛋白。 |
9樓2013-01-16 13:30:15
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2樓2011-04-13 21:46:47
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lstt09nk(金幣+5): 歡迎回歸^_^ 2011-04-16 19:15:39
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:56:22
lstt09nk(金幣+5): 歡迎回歸^_^ 2011-04-16 19:15:39
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:56:22
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Histone用于總蛋白的蛋白定量會怎么樣？ 或者actin用于核蛋白的衡量會怎么樣？ 我不知道你為什么這么想問題。也不知道你為什么有這種疑問？ 組蛋白是和DNA等核酸組合在一起形成核蛋白，換句話，核蛋白組成成分是組蛋白，也非常保守，不會因為受到處理而減少。所以用于作為內(nèi)參。 B-actin，至于為什么作為總蛋白的內(nèi)參，我不想過多解釋。 但是如你所說，如果反過來，肯定不行。 |
3樓2011-04-14 11:50:19
314300420
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
reasonspare(金幣+3): 謝謝分享 2011-04-16 11:06:28
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
reasonspare(金幣+3): 謝謝分享 2011-04-16 11:06:28
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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有些人提取蛋白會選擇胞漿、胞核分開提取，不提取總蛋白，所以做內(nèi)參要選擇相應(yīng)部位表達穩(wěn)定的蛋白。beta-actin在胞漿中表達高效穩(wěn)定，而總蛋白主要成分就是胞漿蛋白，所以beta-actin可以作為總蛋白的內(nèi)參。理論上細胞核內(nèi)不表達beta-actin，所以不能用于核蛋白內(nèi)參。同理，細胞核內(nèi)的蛋白用于做總蛋白的內(nèi)參，自然也不合理，內(nèi)參自當(dāng)選擇與目的蛋白表達部位相同的蛋白才有說服力。 實際情況中，無論什么試劑盒，都不可能完全將胞漿、胞核蛋白完全分離開，提取時總會有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定會有beta-actin，而胞漿蛋白也會有核蛋白的存在，所以你用兩種蛋白做內(nèi)參都能有結(jié)果，只是有的科學(xué)合理，有的不科學(xué)，沒有說服力。 |
4樓2011-04-14 16:30:01
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