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a83875785鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助】WB中,核蛋白內(nèi)參和總蛋白內(nèi)參的問題 已有11人參與
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| 被告知核蛋白內(nèi)參Histone和總蛋白內(nèi)參貝塔-actin分別是用于核蛋白的蛋白衡量和總蛋白的蛋白衡量,但是我不知道為什么要這樣,那么如果用Histone用于總蛋白的蛋白定量會怎么樣?或者actin用于核蛋白的衡量會怎么樣?謝謝了 |
捐助貴賓 (著名寫手)
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有些人提取蛋白會選擇胞漿、胞核分開提取,不提取總蛋白,所以做內(nèi)參要選擇相應(yīng)部位表達穩(wěn)定的蛋白。beta-actin在胞漿中表達高效穩(wěn)定,而總蛋白主要成分就是胞漿蛋白,所以beta-actin可以作為總蛋白的內(nèi)參。理論上細胞核內(nèi)不表達beta-actin,所以不能用于核蛋白內(nèi)參。同理,細胞核內(nèi)的蛋白用于做總蛋白的內(nèi)參,自然也不合理,內(nèi)參自當選擇與目的蛋白表達部位相同的蛋白才有說服力。 實際情況中,無論什么試劑盒,都不可能完全將胞漿、胞核蛋白完全分離開,提取時總會有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定會有beta-actin,而胞漿蛋白也會有核蛋白的存在,所以你用兩種蛋白做內(nèi)參都能有結(jié)果,只是有的科學(xué)合理,有的不科學(xué),沒有說服力。 |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
木蟲 (著名寫手)
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Histone用于總蛋白的蛋白定量會怎么樣? 或者actin用于核蛋白的衡量會怎么樣? 我不知道你為什么這么想問題。也不知道你為什么有這種疑問? 組蛋白是和DNA等核酸組合在一起形成核蛋白,換句話,核蛋白組成成分是組蛋白,也非常保守,不會因為受到處理而減少。所以用于作為內(nèi)參。 B-actin,至于為什么作為總蛋白的內(nèi)參,我不想過多解釋。 但是如你所說,如果反過來,肯定不行。 |

鐵桿木蟲 (著名寫手)
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