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半定量PCR內(nèi)參 已有2人參與
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| 做半定量PCR，提RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后擴(kuò)actin，帶非常亮。擴(kuò)目的基因帶時有兩條帶，經(jīng)比對后鑒定大的那條是基因組帶，小的那條是cDNA帶，大小吻合，說明提RNA過程中有DNA未消化干凈，cDNA中混有DNA污染。鑒于樣本比較多，重新提RNA較麻煩，想了一個辦法，請各位蟲友幫忙看是否可行。本實(shí)驗(yàn)室所用內(nèi)參為actin2，想在設(shè)計actin引物時設(shè)計兩條跨內(nèi)含子的引物，j基因組帶比cDNA帶要長將近200bp, 這樣擴(kuò)actin 的時候就會有兩條帶，一條基因組帶，一條cDNA帶。然后我只將cDNA帶的亮度調(diào)一致，可以認(rèn)為這就是總cDNA的內(nèi)參嗎？大家覺得可以嗎？ |
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lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-01-13 21:51:02
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cicelyzh
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4樓2014-01-13 23:58:58
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