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半定量PCR內(nèi)參 已有2人參與
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| 做半定量PCR,提RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后擴actin,帶非常亮。擴目的基因帶時有兩條帶,經(jīng)比對后鑒定大的那條是基因組帶,小的那條是cDNA帶,大小吻合,說明提RNA過程中有DNA未消化干凈,cDNA中混有DNA污染。鑒于樣本比較多,重新提RNA較麻煩,想了一個辦法,請各位蟲友幫忙看是否可行。本實驗室所用內(nèi)參為actin2,想在設(shè)計actin引物時設(shè)計兩條跨內(nèi)含子的引物,j基因組帶比cDNA帶要長將近200bp, 這樣擴actin 的時候就會有兩條帶,一條基因組帶,一條cDNA帶。然后我只將cDNA帶的亮度調(diào)一致,可以認為這就是總cDNA的內(nèi)參嗎?大家覺得可以嗎? |


鐵桿木蟲 (正式寫手)

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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